Tapadh leibh airson tadhal air Nature.com.Chan eil ach beagan taic CSS aig an tionndadh brobhsair a tha thu a’ cleachdadh.Airson an eòlas as fheàrr, tha sinn a’ moladh gun cleachd thu brobhsair ùraichte (no cuir à comas Modh Co-chòrdalachd ann an Internet Explorer).Anns an eadar-ama, gus dèanamh cinnteach à taic leantainneach, bheir sinn seachad an làrach gun stoidhlichean agus JavaScript.
Tha Toxoplasma gondii na dhìosganach protozoan intracellular a bhios ag atharrachadh meanbh-àrainneachd an òstair gabhaltach agus tha fios gu bheil e co-cheangailte ri tricead fàs tumhair eanchainn.Anns an sgrùdadh seo, tha sinn a’ gabhail beachd gu bheil miRNA-21 exosomal bho ghalar Toxoplasma a’ brosnachadh fàs tumhair eanchainn.Chaidh exosomes bho microglia BV2 le galair Toxoplasma a chomharrachadh agus chaidh dearbhadh a-staigh de cheallan glioma U87.Chaidh pròifilean abairt microRNA exosomal a sgrùdadh a’ cleachdadh arrays de microRNA agus microRNA-21A-5p co-cheangailte ri Toxoplasma gondii agus rèiteach tumhair.Rinn sinn sgrùdadh cuideachd air ìrean mRNA de ghinean co-cheangailte ri tumhair ann an ceallan glioma U87 le bhith ag atharrachadh ìrean miR-21 ann an exosomes agus buaidh exosomes air iomadachadh cealla glioma U87 daonna.Ann an exosomes de cheallan glioma U87 le galair Toxoplasma gondii, tha an abairt de microRNA-21 air a mheudachadh agus tha gnìomhachd ghinean antitumor (FoxO1, PTEN, agus PDCD4) air a lughdachadh.Bidh exosomes a thig bho BV2 air an galar le Toxoplasma ag adhbhrachadh iomadachadh de cheallan glioma U87.Bidh exosomes ag adhbhrachadh fàs de cheallan U87 ann am modal tumhair luch.Tha sinn a’ moladh gum faodadh àite cudromach a bhith aig àrdachadh miR-21 exosomal ann am microglia BV2 le galair Toxoplasma mar neach-adhartachaidh fàs cealla ann an ceallan glioma U87 le bhith a’ lughdachadh ginean antitumor.
Thathas a ’meas gun deach còrr air 18.1 millean cùis de aillse adhartach a dhearbhadh air feadh an t-saoghail ann an 2018, le timcheall air 297,000 tumhair siostam nearbhach meadhanach air am breithneachadh gach bliadhna (1.6% de gach tumhair)1.Tha rannsachadh roimhe air sealltainn gu bheil factaran cunnairt airson a bhith a’ leasachadh tumors eanchainn daonna a’ toirt a-steach grunn thoraidhean ceimigeach, eachdraidh teaghlaich, agus rèididheachd ianachaidh bho uidheamachd teirpeach agus sgrùdaidh cinn.Ach, chan eil fios cinnteach carson a tha na malignan sin ann.Tha timcheall air 20% de aillsean air feadh an t-saoghail air adhbhrachadh le riochdairean gabhaltach, a’ toirt a-steach bhìorasan, bacteria agus dìosganaich3,4.Bidh pathogenan gabhaltach a’ cur dragh air uidheamachdan ginteil na cealla aoigheachd, leithid càradh DNA agus cearcall nan cealla, agus faodaidh iad leantainn gu sèid leantainneach agus milleadh air an t-siostam dìon5.
Is e riochdairean gabhaltach co-cheangailte ri aillse daonna na pathogenan viral as cumanta, a ’toirt a-steach bhìorasan papilloma daonna agus bhìorasan hepatitis B agus C.Faodaidh pàirt a bhith aig parasites cuideachd ann an leasachadh aillse daonna.Tha grunn ghnèithean dìosganach, is iad sin Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis agus Hymenolepis nana, air a bhith an sàs ann an diofar sheòrsan aillse daonna 6,7,8.
Tha toxoplasma gondii na protozoan intracellular a bhios a’ riaghladh meanbh-àrainneachd cheallan aoigheachd gabhaltach.Thathas a’ meas gu bheil am faoigheach seo a’ fulang timcheall air 30% de shluagh an t-saoghail, a’ cur an sluagh gu lèir ann an cunnart9,10.Faodaidh toxoplasma gondii buill-bodhaig deatamach a ghlacadh, a’ toirt a-steach an siostam nearbhach meadhanach (CNS), agus droch thinneasan adhbhrachadh leithid fiabhras eanchainne marbhtach agus encephalitis, gu sònraichte ann an euslaintich le dìonachd9.Ach, faodaidh Toxoplasma gondii cuideachd àrainneachd an aoigh gabhaltach atharrachadh le bhith ag atharrachadh fàs cealla agus freagairtean dìonachd ann an daoine neo-chomasach, a’ leantainn gu cumail suas galar leantainneach asymptomatic9,11.Gu h-inntinneach, leis a’ cho-dhàimh eadar tricead T. gondii agus tricead tumhair eanchainn, tha cuid de na h-aithisgean a’ moladh gu bheil atharrachaidhean àrainneachdail aoigheachd in vivo mar thoradh air galar T. gondii cronach coltach ri meanbh-àrainneachd an tumhair.
Canar luchd-conaltraidh eadar-cheallach ri exosomes a lìbhrigeas susbaint bith-eòlasach, a’ toirt a-steach pròtanan agus searbhagan niuclasach, bho cheallan faisg air làimh16,17.Faodaidh exosomes buaidh a thoirt air pròiseasan bith-eòlasach co-cheangailte ri tumhair leithid anti-apoptosis, angiogenesis, agus metastasis ann am meanbh-àrainneachd an tumhair.Gu sònraichte, tha miRNAs (miRNAn), RNAn beaga neo-chòdachadh timcheall air 22 nucleotides de dh’ fhaid, nan riaghladairean gine post-tar-sgrìobhaidh cudromach a bhios a’ cumail smachd air còrr air 30% de mRNA daonna tron ​​ionad-sàmhchair air a bhrosnachadh le miRNA (miRISC).Faodaidh Toxoplasma gondii dragh a chuir air pròiseasan bith-eòlasach le bhith a’ cumail smachd air abairt miRNA ann an luchd-aoigheachd le galair.Tha comharran cudromach ann am miRNAn aoigheachd airson pròiseasan bith-eòlasach aoigheachd a riaghladh gus ro-innleachd mairsinn a’ dhìosganach a choileanadh.Mar sin, le bhith a’ sgrùdadh atharrachaidhean ann am pròifil miRNA an aoigh air galar le T. gondii cuidichidh sin sinn le bhith a’ tuigsinn an eadar-obrachadh eadar an aoigh agus T. gondii nas soilleire.Gu dearbh, Thirugnanam et al.Mhol 15 gum bi T. gondii a’ brosnachadh carcinogenesis eanchainn le bhith ag atharrachadh an abairt aige air miRNAn aoigheachd sònraichte co-cheangailte ri fàs tumhair agus lorg e gum faod T. gondii gliomas adhbhrachadh ann am beathaichean deuchainneach.
Tha an sgrùdadh seo a’ cuimseachadh air atharrachadh miR-21 exosomal ann am microglia aoigheachd air a bheil Toxoplasma BV2.Chunnaic sinn àite a dh’ fhaodadh a bhith aig miR-21 exosomal atharraichte ann am fàs cheallan glioma U87 mar thoradh air gleidheadh ​​​​ann an niuclas FoxO1 / p27, a tha na thargaid airson miR-21 a tha ro àrd.
Chaidh exosomes a thàinig bho BV2 fhaighinn a’ cleachdadh centrifugation eadar-dhealaichte agus air an dearbhadh le diofar dhòighean gus casg a chuir air truailleadh le co-phàirtean ceallach no bileagan eile.Sheall electrophoresis gel SDS-polyacrylamide (SDS-PAGE) pàtrain eadar-dhealaichte eadar pròtainean a chaidh a thoirt a-mach à ceallan BV2 agus exosomes (Figear 1A), agus chaidh sampallan a mheasadh airson làthaireachd Alix, a chaidh a sgrùdadh le blotting an Iar de chomharran pròtain exosomal ann an .Chaidh bileagan Alix a lorg ann am pròtanan exosome ach chan ann ann am pròtanan lysate cealla BV2 (Fig. 1B).A bharrachd air an sin, chaidh RNA fìor-ghlan bho exosomes a thàinig bho BV2 a sgrùdadh le bhith a’ cleachdadh bioanalyzer.Is ann ainneamh a chaidh fo-aonadan ribosomal 18S agus 28S fhaicinn ann am pàtran imrich RNA exosomal, a’ nochdadh purrachd earbsach (Figear 1C).Mu dheireadh, sheall microscopy dealanach tar-chuir gu robh na h-exosomes a chaidh an sgrùdadh timcheall air 60-150 nm ann am meud agus gu robh structar coltach ri cupa aca a bha àbhaisteach ann am morf-eòlas exosome (Fig. 1D).
Caractachadh exosomes a thàinig bho cheallan BV2.(A) Duilleag dàta sàbhailteachd.Bha proteinichean air an dealachadh bho cheallan BV2 no exosomes a thàinig bho BV2.Tha pàtrain pròtain eadar-dhealaichte eadar ceallan agus exosomes.(B) Mion-sgrùdadh blot an iar air comharra exosomal (Alix).(C) Luachadh air RNA fìor-ghlan bho cheallan BV2 agus exosomes a thàinig bho BV2 a’ cleachdadh bioanalyzer.Mar sin, is ann ainneamh a lorgar fo-aonadan ribosomal 18S agus 28S ann an ceallan BV2 ann an RNA exosomal.(D) Sheall microscopy dealanach tar-chuir gu robh exosomes a chaidh a sgaradh bho cheallan BV2 air an droch dhath le 2% uranyl acetate.Tha exosomes timcheall air 60-150 nm ann am meud agus cumadh cupa (Song and Jung, dàta neo-fhoillsichte).
Chaidh sùil a thoirt air toirt a-steach ceallach de exosomes a thàinig bho BV2 a-steach do cheallan glioma daonna U87 a’ cleachdadh microscopy confocal.Tha exosomes le bileag PKH26 air an suidheachadh gu h-ionadail ann an cytoplasm de cheallan U87.Chaidh nuclei a dhath le DAPI (Fig. 2A), a’ nochdadh gum faod ceallan aoigheachd a bhith air an toirt a-steach do exosomes a thig bho BV2 agus buaidh a thoirt air àrainneachd cheallan luchd-faighinn.
Le bhith a’ toirt a-steach exosomes a thàinig bho BV2 a-steach do cheallan glioma U87 agus exosomes a thàinig bho BV2 le galair Toxoplasma RH air adhbhrachadh le iomadachadh de cheallan glioma U87.(A) Exosomes air an cuairteachadh le ceallan U87 air an tomhas le microscopy confocal.Chaidh ceallan glioma U87 a ghluasad le exosomes air an ainmeachadh le PKH26 (dearg) no gun smachd airson 24 uairean.Chaidh na niùclasan a dhath le DAPI (gorm) agus an uairsin chaidh am faicinn fo mhiocroscop confocal (bàr sgèile: 10 μm, x 3000).(B) Chaidh iomadachadh cealla glioma U87 a dhearbhadh le assay iomadachadh cealla.Chaidh ceallan glioma U87 a làimhseachadh le exosomes airson na h-ùine ainmichte. * Chaidh P <0.05 fhaighinn le deuchainn t Oileanach. * Chaidh P <0.05 fhaighinn le deuchainn t Oileanach. * P < 0,05 an uair sin airson an criomag. * P <0.05 le deuchainn-t nan oileanach. *P <0.05 通过学生t 检验获得. *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 air fhaighinn a’ cleachdadh deuchainn-t nan oileanach.
Às deidh dhuinn dearbhadh gun deach exosomes a thàinig bho BV2 a-steach do cheallan glioma U87, rinn sinn measaidhean leudachaidh cealla gus sgrùdadh a dhèanamh air àite exosomes bho Toxoplasma a thàinig bho BV2 ann an leasachadh cheallan glioma daonna.Sheall làimhseachadh cheallan U87 le exosomes bho cheallan BV2 le galair T. gondii gun do dh’ adhbhraich exosomes le galair T. gondii a thàinig bho BV2 iomadachadh mòran nas àirde de cheallan U87 an taca ri smachd (Fig. 2B).
A bharrachd air an sin, bha na h-aon toraidhean aig fàs ceallan U118 ri U87, leis gu robh Toxoplasma air a bhrosnachadh le exosomes ag adhbhrachadh na h-ìrean iomadachaidh as àirde (dàta nach deach a shealltainn).Stèidhichte air an dàta seo, is urrainn dhuinn innse gu bheil àite cudromach aig exosomes le galair Toxoplasma bho BV2 ann an iomadachadh cealla glioma.
Gus sgrùdadh a dhèanamh air buaidh exosomes a thàinig bho BV2 le galair Toxoplasma air leasachadh tumhair, chuir sinn a-steach ceallan glioma U87 a-steach do luchagan nude airson modal xenograft agus chuir sinn a-steach exosomes a thàinig bho BV2 no exosomes a thàinig bho BV2 le galair RH.Às deidh tumors a thighinn am follais às deidh seachdain 1, chaidh gach buidheann deuchainneach de luchagan 5 a roinn a rèir meud tumhair gus an aon àite tòiseachaidh a dhearbhadh, agus chaidh meud tumhair a thomhas airson 22 latha.
Ann an luchagan leis a’ mhodal xenograft U87, chaidh meud tumhair mòran nas motha fhaicinn anns a’ bhuidheann exosome le galair RH-buaidh BV2 aig latha 22 (Fig. 3A, B).Air an làimh eile, cha robh eadar-dhealachadh mòr ann am meud tumhair eadar a’ bhuidheann exosome a thàinig bho BV2 agus a’ bhuidheann smachd às deidh làimhseachadh exosome.A bharrachd air an sin, bha luchagan air an stealladh le ceallan glioma agus exosomes a’ nochdadh gu fradharcach an tomhas tumhair as motha anns a ’bhuidheann de exosomes a thàinig bho BV2 le galair RH (Fig. 3C).Tha na co-dhùnaidhean sin a’ sealltainn gu bheil exosomes le galar Toxoplasma bho BV2 a’ toirt fàs glioma ann am modal tumhair luch.
Oncogenesis (AC) de exosomes a thàinig bho BV2 ann am modal luchag xenograft U87.Chaidh meud tumhair (A) agus cuideam (B) àrdachadh gu mòr ann an luchagan nude BALB / c air an làimhseachadh le exosomes le galair RH a thàinig bho BV2.Chaidh luchagan nude BALB / c (C) a stealladh gu subcutaneously le ceallan 1 x 107 U87 crochte ann am measgachadh Matrigel.Sia latha às deidh an in-stealladh, chaidh 100 μg de exosomes a thàinig bho BV2 a làimhseachadh ann an luchagan.Chaidh meud tumhair agus cuideam a thomhas air na làithean ainmichte agus às deidh ìobairt, fa leth. *P <0.05. *P <0.05. * r <0,05. *P <0.05. *P <0.05. *P <0.05. * r <0,05. *P <0.05.
Sheall an dàta gun deach 37 miRNAs (16 overexpressed agus 21 downexpressed) co-cheangailte ri dìonachd no leasachadh tumhair atharrachadh gu mòr ann am microglia às deidh galar leis an strain Toxoplasma RH (Fig. 4A).Chaidh ìrean faireachdainn coimeasach de miR-21 am measg miRNAn atharraichte a dhearbhadh le RT-PCR fìor-ùine ann an exosomes a thàinig bho BV2, exosomes air an làimhseachadh le ceallan BV2 agus U87.Sheall cur an cèill miR-21 àrdachadh mòr ann an exosomes bho cheallan BV2 air an robh Toxoplasma gondii (sruth RH) (Fig. 4B).Mheudaich ìrean faireachdainn coimeasach de miR-21 ann an ceallan BV2 agus U87 an dèidh gabhail ri exosomes atharraichte (Fig. 4B).Bha na h-ìrean coimeasach de abairt miR-21 ann am figheagan eanchainn euslaintich tumhair agus luchagan air an robh Toxoplasma gondii (srian ME49) nas àirde na ann an smachdan, fa leth (Fig. 4C).Tha na toraidhean sin co-cheangailte ri eadar-dhealachaidhean eadar na h-ìrean faireachdainn de microRNAn ro-innseach agus dearbhte in vitro agus in vivo.
Atharrachaidhean ann an abairt miP-21a-5p exosomal ann am microglia le galair Toxoplasma gondii (RH).(A) A’ nochdadh atharrachaidhean mòra ann an siRNA co-cheangailte ri dìonachd no leasachadh tumhair às deidh galar T. gondii RH.(B) Chaidh ìrean faireachdainn miR-21 coimeasach a lorg le RT-PCR fìor-ùine ann an exosomes a thàinig bho BV2, exosomes air an làimhseachadh le BV2, agus ceallan U87.(C) Chaidh ìrean faireachdainn miR-21 coimeasach a lorg ann am figheagan eanchainn euslaintich tumhair (N = 3) agus luchagan air an robh Toxoplasma gondii (srann ME49) (N = 3). * Chaidh P <0.05 fhaighinn le deuchainn t Oileanach. * Chaidh P <0.05 fhaighinn le deuchainn t Oileanach. *P < 0,05 an cuideam airson an t-saoghail. * Chaidh P <0.05 fhaighinn a’ cleachdadh deuchainn-t nan oileanach. *P <0.05 通过学生t 检验获得. *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 air fhaighinn a’ cleachdadh deuchainn-t nan oileanach.
Dh'adhbhraich exosomes bho cheallan BV2 le galair RH gu fàs gliomas in vivo agus in vitro (Fig. 2, 3).Gus mRNAn buntainneach a lorg, rinn sinn sgrùdadh air ìrean mRNA de ghinean targaid antitumor, bogsa ceann forc O1 (FoxO1), PTEN, agus bàs cealla prògramaichte 4 (PDCD4) ann an ceallan U87 air an robh galair le exosomes a thàinig bho BV2 no RH BV2.Tha mion-sgrùdadh bioinformatics air sealltainn gu bheil làraich ceangail miR-2121,22 aig grunn ghinean co-cheangailte ri tumhair, a’ gabhail a-steach ginean FoxO1, PTEN, agus PDCD4.chaidh ìrean mRNA de ghinean targaid antitumor a lughdachadh ann an exosomes a thàinig bho BV2 le galair RH an coimeas ri exosomes a thàinig bho BV2 (Fig. 5A).Sheall FoxO1 ìrean pròtain lùghdaichte ann an exosomes a thàinig bho BV2 le galair RH an coimeas ri exosomes a thàinig bho BV2 (Figear 5B).Stèidhichte air na toraidhean sin, dh’ fhaodadh sinn dearbhadh gu bheil exosomes a thàinig bho BV2 le galair RH a’ lughdachadh ginean anti-oncogenic, a’ cumail suas an àite ann am fàs tumhair.
Bidh exosomes a thig bho BV2 le galair toxoplasma RH a’ toirt air falbh ginean antitumor ann an ceallan glioma U87 le exosomes a thig bho BV2 le galair Toxoplasma RH.(A) PCR fìor-ùine de abairt FoxO1, PTEN agus PDCD4 ann an exosomes a thàinig bho T. gondii RH-galar BV2 an coimeas ri PBS exosomes.Chaidh mRNA β-actin a chleachdadh mar smachd.(B) Chaidh abairt FoxO1 a dhearbhadh le blotting an Iar agus chaidh dàta densitometry a mheasadh gu staitistigeil a’ cleachdadh prògram ImageJ. * Chaidh P <0.05 fhaighinn le deuchainn t Oileanach. * Chaidh P <0.05 fhaighinn le deuchainn t Oileanach. *P < 0,05 an cuideam airson an t-saoghail. * Chaidh P <0.05 fhaighinn a’ cleachdadh deuchainn-t nan oileanach. *P <0.05 通过学生t 检验获得. *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 air fhaighinn a’ cleachdadh deuchainn-t nan oileanach.
Gus tuigse fhaighinn air buaidh miP-21 ann an exosomes air riaghladh gine co-cheangailte ri tumhair, chaidh ceallan U87 a ghluasad le inneal-dìon miP-21 a ’cleachdadh Lipofectamine 2000 agus chaidh na ceallan a bhuain 24 uair às deidh tar-chuir.Chaidh ìrean faireachdainn FoxO1 agus p27 ann an ceallan a chaidh an gluasad le luchd-dìon miR-21 an coimeas ri ceallan air an làimhseachadh le exosomes a thàinig bho BV2 a’ cleachdadh qRT-PCR (Fig. 6A, B).Le bhith a’ gluasad an neach-dìon miR-21 gu ceallan U87 gu mòr a’ lughdachadh abairt FoxO1 agus p27 (FIG. 6).
Dh’atharraich miP-21 exosomal exosomal le galair BV2-21 abairt FoxO1 / p27 ann an ceallan glioma U87.Chaidh ceallan U87 a ghluasad le inneal-dìon miP-21 a ’cleachdadh Lipofectamine 2000 agus chaidh ceallan a bhuain 24 uair às deidh tar-chuir.Chaidh ìrean faireachdainn FoxO1 agus p27 ann an ceallan air an gluasad le luchd-dìon miR-21 an coimeas ri ìrean ann an ceallan air an làimhseachadh le exosomes a thàinig bho BV2 a’ cleachdadh qRT-PCR (A, B).
Gus faighinn seachad air freagairt dìon an aoigh, bidh am parasite Toxoplasma ag atharrachadh gu bhith na chiste clò.Bidh iad a’ parasitachadh diofar fhigheagan, a’ toirt a-steach an eanchainn, cridhe, agus fèithe cnàimhneach, fad beatha an aoigh agus ag atharrachadh freagairt dìonachd an aoigh.A bharrachd air an sin, faodaidh iad cearcall cealla agus apoptosis de cheallan aoigheachd a riaghladh, ag adhartachadh an iomadachadh14,24.Bidh Toxoplasma gondii sa mhòr-chuid a’ toirt buaidh air ceallan dendritic aoigheachd, neutrophils, agus loidhne monocyte / macrophage, a’ toirt a-steach microglia eanchainn.Bidh toxoplasma gondii a’ toirt a-steach eadar-dhealachadh macrophages den phenotype M2, a’ toirt buaidh air slànachadh lotan às deidh galar pathogen, agus tha e cuideachd co-cheangailte ri hypervascularization agus fibrosis granulomatous.Faodaidh an pathogenesis giùlain seo de ghalar Toxoplasma a bhith co-cheangailte ri comharran co-cheangailte ri leasachadh tumhair.Faodaidh an àrainneachd nàimhdeil a tha air a riaghladh le Toxoplasma a bhith coltach ris an ro-aillse co-fhreagarrach.Mar sin, faodar gabhail ris gum bu chòir galar Toxoplasma cur ri leasachadh tumors eanchainn.Gu dearbh, chaidh aithris air ìrean àrda de ghalaran Toxoplasma ann an serum euslaintich le diofar tumors eanchainn.A bharrachd air an sin, faodaidh Toxoplasma gondii a bhith na neach-buaidh carcinogenic eile agus a bhith ag obair gu synergistically gus carcinogens gabhaltach eile a chuideachadh gus tumors eanchainn a leasachadh.A thaobh seo, is fhiach a bhith mothachail gu bheil P. falciparum agus bhìoras Epstein-Barr a 'cur gu co-obrachail ri cruthachadh lymphoma Burkitt.
Chaidh sgrùdadh farsaing a dhèanamh air àite exosomes mar riaghladairean ann an raon sgrùdadh aillse.Ach, chan eil mòran tuigse fhathast air àite exosomes eadar dìosganaich agus luchd-aoigheachd gabhaltach.Gu ruige seo, tha grunn riaghladairean, a ’toirt a-steach pròtanan dìomhair, air mìneachadh a dhèanamh air na pròiseasan bith-eòlasach leis am bi dìosganaich protozoan a’ seasamh an aghaidh ionnsaigh aoigheachd agus a ’leantainn air adhart le galair.O chionn ghoirid, tha bun-bheachd air a bhith a 'sìor fhàs gu bheil microvesicles co-cheangailte ri protozoan agus na microRNAn aca ag eadar-obrachadh le ceallan aoigheachd gus àrainneachd fàbharach a chruthachadh airson a bhith beò.Mar sin, tha feum air tuilleadh sgrùdaidhean gus faighinn a-mach an dàimh eadar miRNAs exosomal atharraichte agus iomadachadh cealla glioma.Tha atharrachadh microRNA (ginean cnuasachaidh miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 agus miR-17-92) a’ ceangal ris an neach-adhartachaidh STAT3 ann am macrophages daonna le galair toxoplasma, air a riaghladh agus a’ toirt a-steach anti-bhìorasan. -apoptosis mar fhreagairt do ghalar Toxoplasma gondii 29 .Bidh galar toxoplasma ag àrdachadh faireachdainn miR-17-5p agus miR-106b-5p, a tha co-cheangailte ri grunn ghalaran hyperproliferative 30 .Tha an dàta seo a’ nochdadh gu bheil miRNAn aoigheachd a tha air an riaghladh le galar Toxoplasma nam moileciuilean cudromach airson a bhith beò le dìosganaich agus pathogenesis ann an giùlan bith-eòlasach aoigheachd.
Faodaidh miRNAn atharraichte buaidh a thoirt air diofar sheòrsaichean giùlain aig àm tòiseachadh agus adhartas cheallan malignant, a’ toirt a-steach gliomas: fèin-fhoghainteachd comharran fàis, neo-chunbhalachd do chomharran a tha a’ bacadh fàs, seachnadh apoptosis, comas mac-samhail gun chrìoch, angiogenesis, ionnsaigh agus metastasis, agus sèid.Ann an glioma, chaidh miRNAn atharraichte a chomharrachadh ann an grunn sgrùdaidhean ìomhaigh faireachdainn.
Anns an sgrùdadh làithreach, dhearbh sinn ìrean àrda de abairt miRNA-21 ann an ceallan aoigheachd le galair toxoplasma.miR-21 air a chomharrachadh mar aon de na microRNAn as trice a tha ro àrd ann am tumors cruaidh, a’ toirt a-steach gliomas, 33 agus tha an abairt aige co-cheangailte ri ìre glioma.Tha fianais cruinneachaidh a’ nochdadh gur e oncogene ùr-nodha a th’ ann am miR-21 a tha ag obair mar fheart an-aghaidh apoptotic ann am fàs glioma agus gu bheil cus cus cuideam air ann am figheagan agus plasma de malignan eanchainn daonna.Gu h-inntinneach, tha neo-ghnìomhachd miR-21 ann an ceallan glioma agus figheagan a’ piobrachadh casg air iomadachadh cealla mar thoradh air apoptosis a tha an urra ri caspase.Nochd mion-sgrùdadh bith-fhiosrachail air targaidean ro-mheasta miR-21 grunn ghinean suppressor tumhair co-cheangailte ri slighean apoptosis, a’ toirt a-steach bàs cealla prògramaichte 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN, agus bogsa ceann forc O1 (FoxO1), leis an làrach ceangail miR-2121..22.38 .
Tha FoxO1, mar aon de na factaran tar-sgrìobhaidh (FoxO), an sàs ann a bhith a’ leasachadh diofar sheòrsaichean aillse daonna agus faodaidh e riaghladh ginean suppressor tumhair leithid p21, p27, Bim, agus FasL40.Faodaidh FoxO1 luchd-bacadh cearcall cealla leithid p27 a cheangal agus a chuir an gnìomh gus fàs cealla a chumail fodha.A bharrachd air an sin, tha FoxO1 na phrìomh neach-buaidh air comharran PI3K / Akt agus a’ riaghladh mòran phròiseasan bith-eòlasach leithid adhartas cearcall cealla agus eadar-dhealachadh cealla tro ghnìomhachadh tar-sgrìobhadh p2742.
Ann an co-dhùnadh, tha sinn den bheachd gum faodadh àite cudromach a bhith aig miR-21 exosomal a thàinig bho microglia le galair Toxoplasma mar riaghladair fàis de cheallan glioma (Fig. 7).Ach, tha feum air tuilleadh sgrùdaidhean gus ceangal dìreach a lorg eadar miR-21 exosomal, galar Toxoplasma atharraichte, agus fàs glioma.Thathas an dùil gum bi na toraidhean sin mar thoiseach tòiseachaidh airson a bhith a’ sgrùdadh a’ cheangail eadar gabhaltachd Toxoplasma agus tricead glioma.
Tha diagram sgeamach de uidheamachd carcinogenesis glioma (eanchainn) air a mholadh san sgrùdadh seo.Bidh an t-ùghdar a’ tarraing a-steach PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA).
Bha a h-uile protocol deuchainneach san sgrùdadh seo, a’ gabhail a-steach cleachdadh bheathaichean, a rèir Stiùireadh Beusach Coitcheann Comataidh Cùram Bheathaichean is Luchd-cleachdaidh Oilthigh Nàiseanta Seoul agus chaidh aontachadh le Bòrd Ath-bhreithneachaidh Institiud Sgoil Leigheas Oilthigh Nàiseanta Seoul (àireamh IRB SNU- 150715).-2).Chaidh a h-uile modh deuchainneach a dhèanamh a rèir molaidhean ARRIVE.
Bha microglia luchag BV2 agus ceallan glioma daonna U87 air an àiteachadh ann am Meadhan Iolaire Atharraichte Dulbecco (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) agus Meadhanach Institiud Cuimhneachaidh Pàirc Roswell (RPMI; Welgene), fa leth, anns gach fear le serum bò fetal 10%, 4 mM l- glutamine, penicillin 0.2 mM agus streptomycin 0.05 mM.Bha ceallan air an àiteachadh ann an goireadair le 5% CO2 aig 37 ° C.Chaidh loidhne cealla glioma eile, U118, a chleachdadh airson coimeas ri ceallan U87.
Gus exosomes a sgaradh bho shreathan RH agus ME49 le galair T. gondii, chaidh T. gondii tachyzoites (RH strain) a bhuain bho chuas bhoilg de luchagan BALB / c 6-seachdain a chaidh an stealladh 3-4 latha roimhe sin.Chaidh tachyzoites a nighe trì tursan le PBS agus an glanadh le centrifugation ann an 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)43.Gus tachyzoites de strain ME49 fhaighinn, chaidh luchagan BALB / c a thoirt a-steach gu intraperitoneally le 20 cysts clò agus chaidh cruth-atharrachadh tachyzoite ann an cysts a chruinneachadh le bhith a ’nighe a’ chuas bhoilg air an 6-8mh latha às deidh galar (PI).Tha luchagan air an galar le PBS.Chaidh tachyzoites ME49 fhàs ann an ceallan le taic bho 100 μg / ml penicillin (Gibco / BRL, Grand Island, NY, na SA), streptomycin 100 μg / ml (Gibco / BRL), agus serum bò fetal 5% (Lonza, Walkersville, MD ) .., USA) aig 37 ° C agus 5% carbon dà-ogsaid.Às deidh àiteachadh ann an ceallan Vero, chaidh tachyzoites ME49 a thoirt seachad dà uair tro shnàthaid tomhais 25 agus an uairsin tro shìoltachan 5 µm gus sprùilleach agus ceallan a thoirt air falbh.Às deidh nighe, chaidh na tachyzoites ath-chuiridh ann am PBS44.Chaidh cisteagan meitabileach de Toxoplasma gondii strain ME49 a chumail suas le in-stealladh intraperitoneal de chisteachan air an dealachadh bho eanchainn luchagan gabhaltach C57BL / 6 (Ionad Orient Bio Animal, Seongnam, Korea).Chaidh eanchainn luchagan le galair ME49 a bhuain às deidh 3 mìosan de PI agus am bior fo mhiocroscop gus cysts a lorg.Chaidh na luchagan gabhaltach a chumail fo chumhachan sònraichte gun pathogen (SPF) aig Sgoil Leigheas Oilthigh Nàiseanta Seoul.
Chaidh RNA iomlan a thoirt a-mach à exosomes a thàinig bho BV2, ceallan BV2 agus maothran a’ cleachdadh an miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, A’ Ghearmailt) a rèir stiùireadh an neach-dèanamh, a’ toirt a-steach an ùine brosnachaidh airson a’ cheum elution.Chaidh an dùmhlachd RNA a dhearbhadh air speactrophotometer NanoDrop 2000.Chaidh càileachd microarrays RNA a mheasadh le bhith a’ cleachdadh bith-anailisiche Agilent 2100 (Agilent Technologies, Amstelveen, an Òlaind).
Chaidh DMEM le 10% exosome-bochd FBS ullachadh le ultracentrifugation aig 100,000g airson 16 uairean aig 4 ° C agus air a shìoladh tro shìoltachan 0.22 µm (Nalgene, Rochester, NY, USA).Bha ceallan BV2, 5 × 105, air an àiteachadh ann an DMEM anns an robh 10% FBS le ìsleachadh exosome agus antibiotaicean 1% aig 37 ° C agus 5% CO2.Às deidh 24 uair de goir, chaidh tachyzoites de strain RH no ME49 (MOI = 10) a chur ris na ceallan agus chaidh dìosganaich neo-ionnsaigheach a thoirt air falbh taobh a-staigh uair a-thìde agus an ath-lìonadh le DMEM.Bha exosomes bho cheallan BV2 air an dealachadh le centrifugation diofraichte atharraichte, an dòigh as fharsainge a chleachdar.Ath-chuir am peilear exosome ann an 300 µl PBS airson RNA no mion-sgrùdadh pròtain.Chaidh an cruinneachadh de exosomes iomallach a dhearbhadh le bhith a’ cleachdadh pasgan measaidh pròtain BCA (Pierce, Rockford, IL, USA) agus speactrphotometer NanoDrop 2000.
Chaidh precipitates bho cheallan BV2 no exosomes a thàinig bho BV2 a chuir a-steach ann am fuasgladh às-tharraing pròtain PRO-PREP ™ (iNtRon Biotechnology, Seongnam, Korea) agus chaidh pròtanan a luchdachadh air gels polyacrylamide 10% SDS le dath gorm sgoinneil Coomassie.A bharrachd air an sin, chaidh pròtainean a ghluasad gu membran PVDF airson 2 uair.Chaidh blots an iar a dhearbhadh le bhith a’ cleachdadh an antibody Alix (Teicneòlas Comharran cealla, Beverly, MA, USA) mar chomharradh exosomal.Chaidh IgG (H + L) an-aghaidh luchag gobhar conjugated HRP (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) agus anailisiche ìomhaigh luminescent LAS-1000 plus (Fuji Photographic Film, Tokyo, Iapan) a chleachdadh mar antibody àrd-sgoile..Chaidh microscopy dealanach tar-chuir a dhèanamh gus sgrùdadh a dhèanamh air meud agus morf-eòlas exosomes.Chaidh exosomes iomallach bho cheallan BV2 (6.40 µg / µl) ullachadh air mogalan còmhdaichte le carbon agus air an dath gu àicheil le 2% uranyl acetate airson 1 min.Chaidh na sampallan ullaichte fhaicinn aig bholtadh luathachaidh de 80 kV a’ cleachdadh JEOL 1200-EX II (Tokyo, Iapan) uidheamaichte le camara ES1000W Erlangshen CCD (Gatan, Pleasanton, CA, USA).
Chaidh exosomes a thàinig bho BV2 a dhath le bhith a’ cleachdadh an PKH26 Red Fluorescent Linker Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) airson 15 mionaidean aig teòthachd an t-seòmair.Chaidh ceallan U87, 2 × 105, le exosomes le bileag PKH26 (dearg) no exosomes mar smachd àicheil, a bhrosnachadh aig 37 ° C airson 24 uairean ann an goireadair 5% CO2.Chaidh niuclasan cealla U87 a dhath le DAPI (gorm), chaidh ceallan U87 a shuidheachadh ann am paraformaldehyde 4% airson 15 min aig 4 ° C agus an uairsin air an sgrùdadh ann an siostam miocroscop confocal Leica TCS SP8 STED CW (Leica Microsystems, Mannheim, A’ Ghearmailt).amhairc.
Chaidh cDNA a cho-chur bho siRNA a’ cleachdadh a’ chiad synthesis sreath de Mir-X siRNA agus pasgan SYBR qRT-PCR (Takara Bio Inc., Shiga, Iapan).Chaidh PCR cainneachdail fìor-ùine a dhèanamh a’ cleachdadh siostam lorg PCR fìor-ùine iQ5 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) a’ cleachdadh primers agus teamplaidean measgaichte le SYBR Premix.Chaidh DNA a mheudachadh airson 40 cearcall de dhì-nàdurachadh aig 95 ° C airson 15 s agus anail aig 60 ° C airson 60 s.Chaidh an dàta bho gach freagairt PCR a sgrùdadh a’ cleachdadh modal mion-sgrùdadh dàta bathar-bog siostam optigeach iQ ™ 5 (Bio-Rad).Chaidh atharrachaidhean coimeasach ann an abairt gine eadar ginean targaid taghte agus β-actin / siRNA (agus U6) a thomhas a’ cleachdadh an dòigh lùbte àbhaisteach.Tha na sreathan primer a chaidh a chleachdadh air an sealltainn ann an Clàr 1.
Chaidh ceallan glioma 3 x 104 U87 a shìolachadh ann am pleitean tobar 96 agus measgachadh le exosomes le galair Toxoplasma a thàinig bho BV2 (50 μg / mL) no exosomes nonpulse a thàinig bho BV2 (50 μg / mL) mar smachdan aig 12, 18 agus 36 uairean .Chaidh an ìre leudachaidh cealla a dhearbhadh le bhith a’ cleachdadh an Cell Counting Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Iapan) (Figearan Leasachail S1-S3) 46 .
Chaidh luchagan boireann BALB / c nude boireann 5-seachdain a cheannach bho Orient Bio (Seongnam-si, Korea a-Deas) agus an cumail leotha fhèin ann an cèidsichean steril aig teòthachd an t-seòmair (22 ± 2 ° C) agus taiseachd (45 ± 15 ° C).%) aig teòthachd an t-seòmair (22 ± 2 ° C) agus taiseachd (45 ± 15%).Chaidh cearcall solais 12-uair agus cearcall dorcha 12-uair a dhèanamh fo SPF (Ionad Ainmhidhean Sgoil Leigheas Oilthigh Nàiseanta Seoul).Chaidh luchagan a roinn air thuaiream ann an trì buidhnean de luchagan 5 gach fear agus chaidh a h-uile buidheann a thoirt a-steach gu subcutaneously le 400 ml de PBS anns an robh ceallan glioma 1 x 107 U87 agus lùghdaich factar fàis BD Matrigel ™ (BD Science, Miami, FL, USA).Sia latha às deidh in-stealladh tumhair, chaidh 200 mg de exosomes a thàinig bho cheallan BV2 (le / às aonais gabhaltachd Toxoplasma) a chuir a-steach don làrach tumhair.Dà latha air fhichead às deidh galar tumhair, chaidh meud tumhair luchagan anns gach buidheann a thomhas le caliper trì tursan san t-seachdain, agus chaidh meud an tumhair a thomhas leis an fhoirmle: 0.5 × (leud) × 2 × fad.
Mion-sgrùdadh abairt MicroRNA a’ cleachdadh sreath miRNA miRCURYTM LNA, tha 7mh ginealach air, arrays mmu agus rno (EXIQON, Vedbaek, an Danmhairg) a’ còmhdach 1119 luchagan le deagh charactar am measg 3100 sgrùdairean glacaidh miRNA daonna, luchag is radan.Rè a 'mhodh-obrachaidh seo, chaidh 250 gu 1000 ng de RNA iomlan a thoirt air falbh bhon 5 ′-phosphate le làimhseachadh le phosphatase alcalin intestinal laogh agus an uairsin le bileagan le dath flùraiseach uaine Hy3.Chaidh na sampallan le bileagan an uairsin a cho-fhilleadh le bhith a’ luchdachadh sleamhnagan microarray a’ cleachdadh pasgan seòmar tar-chuiridh (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) agus pasgan sleamhnag tar-chinealach (Agilent Technologies).Chaidh tar-chur a dhèanamh airson 16 uairean aig 56 ° C, agus an uairsin chaidh na microarrays a nighe a rèir molaidhean an neach-dèanamh.Chaidh na sleamhnagan microarray giullachd an uairsin a sganadh a’ cleachdadh siostam sganaidh microarray Agilent G2565CA (Agilent Technologies).Chaidh ìomhaighean scan a thoirt a-steach le bhith a’ cleachdadh bathar-bog Agilent Feature Extraction dreach 10.7.3.1 (Agilent Technologies) agus chaidh dian fluorescence gach ìomhaigh a thomhas a’ cleachdadh am faidhle GAL co-fhreagarrach de phròtacal atharraichte Exiqon.Tha dàta microarray airson an sgrùdadh làithreach air a thasgadh ann an stòr-dàta GEO fo àireamh aonta GPL32397.
Chaidh mion-sgrùdadh a dhèanamh air cunntasan riochdachaidh de miRNAn exosomal aibidh ann am microglia de shreathan RH no ME49 air an robh Toxoplasma a’ cleachdadh diofar innealan lìonra.chaidh miRNAs co-cheangailte ri leasachadh tumhair a chomharrachadh a’ cleachdadh miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) agus air an sìoladh a-mach le dian chomharran àbhaisteach (log2) nas motha na 8.0.Am measg miRNAn, chaidh miRNAn air an cur an cèill gu eadar-dhealaichte a lorg gu robh iad còrr is 1.5-fhillte air an atharrachadh le mion-sgrùdadh sìoltachain air miRNAn air an atharrachadh le sreathan RH no ME49 air an robh T. gondii.
Chaidh ceallan a shìolachadh ann am pleitean sia-tobar (3 x ceallan 105 / tobar) ann an opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) a’ cleachdadh Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).Bha na ceallan tar-chuir air an àiteachadh airson 6 uairean agus an uairsin chaidh am meadhan atharrachadh gu meadhan ùr iomlan.Chaidh ceallan a bhuain 24 uair an dèidh tar-chuir.
Chaidh mion-sgrùdadh staitistigeil a dhèanamh sa mhòr-chuid a’ cleachdadh deuchainn-t nan oileanach le bathar-bog Excel (Microsoft, Washington, DC, USA).Airson mion-sgrùdadh beathach deuchainneach, chaidh ANOVA dà-shligheach a dhèanamh a’ cleachdadh bathar-bog Prism 3.0 (Bathar-bog GraphPad, La Jolla, CA, USA). Bha luachan P < 0.05 air am faicinn cudromach gu staitistigeil. Bha luachan-P < 0.05 air am meas cudromach gu staitistigeil. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Bha luachan P <0.05 air am meas cudromach gu staitistigeil. P 值< 0.05 mìle meatair ceàrnagach. P gu <0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. Bha luachan P <0.05 air am meas cudromach gu staitistigeil.
Chaidh a h-uile protocol deuchainneach a chaidh a chleachdadh san sgrùdadh seo aontachadh le Bòrd Lèirmheas Institiùdail Sgoil Leigheas Oilthigh Nàiseanta Seoul (àireamh IRB SNU-150715-2).
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.Tuairmse air tricead aillse cruinne agus bàsmhorachd ann an 2018: stòran agus dòighean GLOBOCAN.Mìneachadh.J. Ruck 144, 1941–1953 (2019).
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Sealladh air na factaran cunnairt a th’ aig tumors eanchainn agus na h-eadar-theachdan teirpeach aca. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Sealladh air na factaran cunnairt a th’ aig tumors eanchainn agus na h-eadar-theachdan teirpeach aca.Rashid, S., Rehman, K. agus Akash, MS Lèirmheas air factaran cunnairt airson tumors eanchainn agus prìomh eadar-theachdan teirpeach. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS Tuigse dhomhainn air factaran cunnart tumhair eanchainn agus eadar-theachdan teirpeach.Rashid, S., Rehman, K. agus Akash, MS Lèirmheas air factaran cunnairt airson tumors eanchainn agus prìomh eadar-theachdan teirpeach.Saidheans bith-mheidigeach.Cungadair.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Eadar-obrachadh bacterial-bhìorasach ann an cansearan slighe gnèitheasach daonna agus boireann: Geàrr-chunntas air fianais epidemio-eòlais agus obair-lann. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Eadar-obrachadh bacterial-bhìorasach ann an cansearan slighe gnèitheasach daonna agus boireann: Geàrr-chunntas air fianais epidemio-eòlais agus obair-lann.Kato I., Zhang J. agus Sun J. Eadar-obrachaidhean bacterial-viral ann an aillse an t-slighe gastrointestinal daonna agus slighe gnèitheasach boireann: geàrr-chunntas de dhàta epidemio-eòlasach agus obair-lann. Ceitidh, I., Zhang, J. & Sun, J. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. Eadar-obrachadh bacterio-viral ann an cnàmhadh cuas beòil daonna agus slighe gintinn boireann: geàrr-chunntas air saidheans galair mòr-chòrdte agus fianais obair-lann.Kato I., Zhang J. agus Sun J. Eadar-obrachadh bacterial-bhìorasach ann an aillse gastrointestinal daonna agus aillse gnèitheasach boireann: geàrr-chunntas de dhàta epidemio-eòlasach agus obair-lann.Ailse 14, 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL Bho ghalar gu aillse: Mar a bhios bhìorasan tumhair DNA ag atharrachadh metabolism cealla meadhan gualain agus lipid. Magon, KL & Parish, JL Bho ghalar gu aillse: Mar a bhios bhìorasan tumhair DNA ag atharrachadh metabolism cealla meadhan gualain agus lipid.Mahon, KL agus Paraiste, JL Galar teine ​​​​gu aillse: mar a bhios bhìorasan tumhair stèidhichte air DNA ag atharrachadh metabolism cealla meadhan gualain agus lipid. Magon, KL & Parish, JL Ainm Tag: DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代。 Magon, KL & Parish, JL Bho ghalar gu aillse: mar a bhios bhìorasan tumhair DNA ag atharrachadh metabolism cealla meadhan gualain agus lipid.Mahon, KL agus Paraiste, JL A’ losgadh galair gu aillse: mar a bhios bhìorasan tumhair DNA ag atharrachadh metabolism sa mheadhan gualain agus lipid ann an ceallan aoigheachd.Bith-eòlas fosgailte.11, 210004 (2021).
Correia da Costa, JM et al.Estrogens catechol de schistosomes agus flukes ae agus aillse co-cheangailte ri helminth.aghaidh.teth a-staigh.5, 444 (2014).