Tha Giardia duodenum na fhàs-bheairt dhìosganach a dh’ adhbhraicheas giardiasis, galar caolan gu sònraichte cumanta ann am pàistean òga le comharran clionaigeach den bhuinneach.Tha sinn air aithris roimhe seo gu bheil G. duodenalis extracellular a 'toirt air adhart gnìomhachadh nucleotides ceangail 3 (NLRP3) coltach ri oligomerization intracellular agus a' riaghladh freagairtean sèididh aoigheachd tro secretion vesicle extracellular (EV).Ach, tha na dearbh phàtranan moileciuil den duodenococcal EV (GEV) co-cheangailte ri pathogen a tha an sàs sa phròiseas seo agus àite an inflammasome NLRP3 ann an giardiasis fhathast ri shoilleireachadh.
Chaidh plasmids abairt eukaryotic ath-leasaichte pcDNA3.1 (+) -alpha-2 agus alpha-7.3 giardins ann an GEV a thogail, a ghluasad a-steach do macrophages peritoneal bun-sgoile luchag, agus a lorg le bhith a’ tomhas am moileciuil targaid sèid caspase-1.Chaidh an ìre abairt p20 a sgrìobadh..Chaidh G. duodenalis alpha-2 agus alpha-7.3 giardines a chomharrachadh bho thùs le bhith a 'tomhas NLRP3 inflammasome (NLRP3, pro-interleukin-1 beta [IL-1β], pro-caspase-1 agus caspase-1 p20), secretion IL.1β, ìrean oligomerization pròtain spot apoptotic (ASC), agus sgìreachadh immunofluorescent de NLRP3 agus ASC.Chaidh àite an NLRP3 inflammasome ann an pathogenicity G. duodenalis an uairsin a mheasadh le bhith a’ cleachdadh luchagan anns an deach gnìomhachd NLRP3 a bhacadh (luchagan air am bacadh le NLRP3) agus chaidh sùil a chumail air atharrachaidhean pathological ann an cuideam bodhaig, eallach dìosganach duodenal, agus clò duodenal.A bharrachd air an sin, rinn sinn sgrùdadh an robh hiardines alpha-2 agus alpha-7.3 a’ toirt a-steach secretion IL-1β in vivo tron ​​NLRP3 inflammasome agus cho-dhùin sinn àite nam moileciuilean sin ann an pathogenicity G. duodenalis ann an luchagan.
Bidh giardines Alpha-2 agus alpha-7.3 ag adhbhrachadh gnìomhachd an NLRP3 inflammasome in vitro.Mar thoradh air an sin chaidh p20 caspase-1 a chuir an gnìomh, àrdachadh ann an ìrean faireachdainn de phròtainean NLRP3, pro-IL-1β, agus pro-caspase-1, àrdachadh mòr ann an secretion IL-1β, cruthachadh spotan ASA anns an cytoplasm, agus inntrigeadh ASA oligomerization.Sèid NLRP3 Bidh call penile a’ dèanamh nas miosa de pathogenicity G. duodenalis ann an luchagan.Bha luchagan air an làimhseachadh le cysts le gavage bho luchagan le bacadh NLRP3 a’ nochdadh àireamh nas motha de trophozoites agus droch mhilleadh air an villi duodenal, air a chomharrachadh le crypts necrotic le crìonadh agus branndadh.Tha deuchainnean in vivo air sealltainn gum faod giardines alpha-2 agus alpha-7.3 secretion de IL-1β a bhrosnachadh tron ​​​​NLRP3 inflammasome, agus lughdaich banachdach le giardines alpha-2 agus alpha-7.3 pathology G. duodenalis ann an luchagan.
Air an gabhail còmhla, tha toraidhean an sgrùdaidh seo a’ moladh gu bheil giardia alpha-2 agus alpha-7.3 ag adhbhrachadh ath-riarachadh sèid NLRP3 aoigheachd agus a’ lughdachadh gabhaltachd G. duodenalis ann an luchagan, a tha nan targaidean gealltanach airson casg a chuir air giardiasis.
Tha Giardia duodenum na dhìosganach protozoan extracellular a tha a 'fuireach anns a' ghalair bheag agus ag adhbhrachadh 280 millean cùis de giardiasis leis a 'bhuineach gach bliadhna, gu h-àraid am measg clann òga ann an dùthchannan fo leasachadh [1].Bidh daoine air an galar le uisge òil no biadh air a thruailleadh le cysts M. duodenum, a bhios an uairsin a’ dol a-steach don stamag agus air an spìonadh anns na sùgh gastric.Bidh trophozoites Giardia duodenum a 'ceangal ris an epithelium duodenal, ag adhbhrachadh nausea, vomiting, a' bhuinneach, pian bhoilg, agus call cuideim.Tha daoine fa leth le dìonachd agus fibrosis cystic buailteach do ghalaran.Faodaidh galar cuideachd tachairt tro ghnè beòil agus anal [2].Is e drogaichean leithid metronidazole, tinidazole, agus nitazoxanide na roghainnean làimhseachaidh as fheàrr leotha airson galairean duodenal [3].Ach, tha na drogaichean chemotherapy seo ag adhbhrachadh droch bhuaidhean leithid nausea, carcinogenesis, agus genotoxicity [4].Mar sin, feumar ro-innleachdan nas èifeachdaiche a leasachadh gus casg a chuir air galar G. duodenalis.
Tha inflammasomes nan clas de dh’ iom-fhilltean pròtain cytosolic a tha nam pàirt den fhreagairt dìonach inneach, a ’cuideachadh le bhith a’ dìon an aghaidh ionnsaigh pathogen agus a ’meadhanachadh freagairtean sèid [5].Am measg nan inflammasomes sin, chaidh sgrùdadh farsaing a dhèanamh air oligomerization ceangail nucleotide (NOD) receptor 3 (NLRP3) oligomerization ceangail nucleotide (NLRP3) coltach ri nucleotide coltach ri inflammasome oir faodar a lorg le diofar phàtranan moileciuil co-cheangailte ri pathogen / milleadh (PAMP /). DAMP), ag aithneachadh, a’ gnìomhachadh an t-siostam dìon gnèitheach.agus a 'riaghladh homeostasis intestinal ann am mòran ghalaran inflammatory [6,7,8].Tha e a’ toirt a-steach an gabhadair aithne pàtrain (PRR) NLRP3, inneal-atharrachaidh pròtain spot apoptotic (ASC), agus èifeachd procaspase-1 no procaspase-11.Tha an NLRP3 inflammasome ag obair mar aoigh an-aghaidh ionnsaigh pathogen, mar a chaidh fhaicinn ann an Neospora caninum [9], Paracoccidioides brasiliensis [10], agus sgrùdaidhean Leishmania.[11], ach chaidh aithris cuideachd gu bheil gnìomhachadh an NLRP3 inflammasome a 'cuingealachadh freagairtean dìon dìon agus a' dèanamh adhartas galair, mar eisimpleir, ann an cnuimhean [12].Stèidhichte air na co-dhùnaidhean a rinn sinn roimhe, dh’ innis sinn gu bheil G. duodenalis extracellular a’ piobrachadh gnìomhachd intracellular de shèid NLRP3 agus ag atharrachadh freagairtean sèididh aoigheachd le bhith a’ cuir a-mach bileagan extracellular (EVs) [13].Ach, tha àite an NLRP3 inflammasome ann an galar G. duodenalis in vivo fhathast ri dhearbhadh.
Chaidh Giardins a mhìneachadh an toiseach mar phàirtean structarail den G. duodenalis cytoskeleton agus tha àite cudromach aca ann an gluasad trophozoite agus ceangal cealla epithelial anns a’ ghalair bheag.Gus atharrachadh nas fheàrr a dhèanamh air an àrainneachd agus àrdachadh air an eòlas-inntinn aca, leasaich G. duodenalis trophozoites structar cytoskeletal sònraichte air a dhèanamh suas de 8 flagella, 1 bodhaig meadhanach, agus 1 diosc ventral [14].Bidh na trophozoites de Giardia duodenum a 'cleachdadh an cytoskeleton gus a dhol a-steach don bhroinn bheag àrd, gu h-àraid an duodenum, agus a cheangal ri enterocytes.Bidh iad daonnan a 'dèanamh imrich agus a' ceangal ri ceallan epithelial a 'cleachdadh metabolism cealla.Mar sin, tha dlùth dhàimh eadar an cytoskeleton aca agus fòirneart.Tha giardines sònraichte airson Giardia duodenum nam pàirtean den structar cytoskeleton [15] agus tha iad air an roinn ann an ceithir clasaichean: α-, β-, γ-, agus δ-giardines.Tha 21 ball den teaghlach α-giardin, agus tha comas aca uile a tha an urra ri calcium gus fospholipids a cheangal [16].Bidh iad cuideachd a 'ceangal an cytoskeleton ris an membran cealla.Ann an daoine fa leth le buineach air adhbhrachadh le G. duodenalis, tha α-giardins air an cur an cèill gu mòr agus gu bheil iad a 'toirt ionnsaigh air rè galar [17].Banachdachan heterologous stèidhichte air Giardia alfa-1 air an dìon an aghaidh giardiasis ann an luchagan agus tha iad nan antigens tagraiche airson leasachadh banachdach [18].Tha Alpha-8 giardin, ionadail anns an membran plasma agus flagella, ach chan ann anns an diosc ventral, ag àrdachadh motility agus ìre fàis trophozoites ann an G. duodenalis [19].Bidh Alpha-14 giardin a 'ceangal ri structaran microtubule air flagella agus a' toirt buaidh air comasachd G. duodenalis [20].Tha Alpha-11 giardine an làthair ann am pailteas tron ​​​​chuairt-beatha, agus tha cus cuideam de alpha-11 giardine a 'dèanamh cron air G. duodenalis fhèin [21].Ach, chan eil e soilleir a bheil alpha-2 giardine agus alpha-7.3 giardine nan dìon an aghaidh galar G. duodenalis agus na dòighean bunaiteach aca.
Anns an sgrùdadh seo, chaidh plasmids abairt eukaryotic ath-leasaichte pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine agus pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine a thionndadh gu macrophages peritoneal bun-sgoile luchag gus an neach-aoigheachd NLRP3 a ghnìomhachadh.Chaidh targaidean inflammasome an uairsin a sgrìobadh.Rinn sinn measadh cuideachd air àite an NLRP3 inflammasome ann an pathogenicity G. duodenalis, rinn sinn sgrùdadh air an robh alpha-2 agus alpha-7,3 giardines ag adhbhrachadh gnìomhachadh an inflammasome NLRP3 in vivo, agus cho-dhùin sinn gu bheil an dà dhreuchd sin aig giardines ann an pathogenicity of G. duodenalis.B’ e ar n-amas coitcheann targaidean gealltanach a leasachadh airson casg a chuir air galar G. duodenalis.
Chaidh seòrsa fiadhaich (WT) C57BL/6 luchagan boireann aois 5-8 seachdainean a cheannach bho Ionad Bheathaichean Deuchainneach Liaoning Changsheng (Liaoning, Sìona).Bha cothrom an-asgaidh aig luchagan air uisge, fhuair iad biadh sterilichte agus chaidh an cumail ann an cearcall aotrom / dorcha 12/12 uair.Mus deach an galar, fhuair luchagan antibiotics ad libitum ann an uisge òil le taic bho ampicillin (1 mg / mL), vancomycin (1 mg / mL), agus neomycin (1.4 mg / mL) (uile air an ceannach bho Shanghai, Sìona, fàs-bheairtean fuadain) [22 ].].Bha luchagan a chaill an comas ithe agus òl airson> 24 uair a thìde agus a chaill ≥ 20% de chuideam bodhaig air am milleadh gu daonnach le gluasad ceirbheacsach.
Chaidh cur ris WB G. duodenalis trophozoites (Cruinneachadh Cultar Seòrsa Ameireagaidh, Manassas, na SA) le 12.5% ​​serum bò fetal (FBS; Every Green, Zhejiang, Sìona) agus bile bò 0.1% (Sigma-Aldrich, St. Missouri, USA). ).USA) fo chumhachan microaerobic.Chaidh trophozoites confluent a chruinneachadh air deigh agus an toirt seachad aig co-mheas de 1: 4 airson tuilleadh gintinn.
Chaidh cysts Giardia duodenum a thoirt a-steach mar a chaidh a mhìneachadh roimhe [23], chaidh trophozoites a bhuain ann an ìre logarithmic agus an uairsin air an lagachadh le meadhan a’ toirt a-steach cuairteachadh, pH 7.1 (TYI-S-33 atharraichte) gu dùmhlachd deireannach de 1 × 106 trophozoites / mL.dùmhlachd bile 0.05% meadhanach).Bha trophozoites air an àiteachadh fo chumhachan anaerobic aig 37 ° C gus an ìre fàis logarithmach.Atharraich am meadhan gu meadhan brosnachaidh cyst (pH 7.8; meadhan TYI-S-33 atharraichte le dùmhlachd bile 1%) agus cultar G. duodenalis aig 37 ° C airson 48-96 uairean, nuair a chaidh na cysts cruthachaidh fhaicinn fo mhiocroscop.Às deidh don mhòr-chuid de na trophozoites a bhith air an toirt a-steach gus cysts a chruthachadh, chaidh am measgachadh cultair a bhuain agus a chuir air ais ann an uisge deionized sterile gus na trophozoites a bha air fhàgail a ghlanadh.Chaidh cysts a chunntadh agus a stòradh aig 4 ° C airson mion-sgrùdaidhean às deidh sin tro phìob gastric ann an luchagan.
Chaidh vesicles extracellular Giardia (GEVs) a bheairteachadh mar a chaidh a mhìneachadh roimhe [13].Chaidh trophozoites ann an ìre fàis logarithmic ath-chuir a-steach ann am meadhan atharraichte TYI-S-33 air ullachadh le FBS le lughdachadh exosome (Gnìomhachasan Bith-eòlasach, Beit-Haemek, Israel) gu dùmhlachd deireannach de 1 × 106 dìosganaich / mL agus air an gortachadh airson 12 uairean.air an dealachadh bhon chultar supernatant le centrifugation aig 2000 g airson 10 min, 10,000 g airson 45 min, agus 100,000 g airson 60 min.Chaidh precipitates a sgaoileadh ann an saline buffered fosfáit (PBS), air a thomhas le bhith a’ cleachdadh pasgan measaidh pròtain BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) agus air a stòradh aig -80 ° C. no air a chleachdadh gu dìreach airson tuilleadh mion-sgrùdaidhean.
Chaidh macrophages peritoneal luch bun-sgoile ullachadh mar a chaidh a mhìneachadh roimhe [24].Ann an ùine ghoirid, chaidh luchagan (aois 6-8 seachdainean) a thoirt a-steach (intraperitoneally [ip]) le 2.5 ml de mheadhan thioglycol leaghan 2.98% Difco (BD, Franklin Lakes, NJ, USA) agus bhiadhaich iad 3-4 palates.Chaidh casg de macrophages a chruinneachadh bho chuas bhoilg luchainn às deidh euthanasia agus centrifuged 3 tursan aig 1000 g airson 10 mionaidean.Chaidh ceallan buain a lorg le cytometry sruthadh a’ cleachdadh an comharra CD11b gus an robh purrachd cealla> 98%, an uairsin air a chur ri truinnsearan cultar cealla 6-tobar (4.5 x ceallan 106 / tobar) agus air an gortachadh le 10% FBS (Bioindustry) aig 37 ° C.agus 5% CO2.
Chaidh RNA a thoirt a-mach à trophozoites 1 × 107 ann an 1 ml de ath-ghnìomhaiche TRIzol (Vazyme, Nanjing, Sìona), chaidh DNA genomic a thoirt a-mach à G. duodenalis RNA iomlan a’ cleachdadh MonScript dsDNase (Monad, Wuhan, Sìona) agus DNA co-phàirteach (cDNA) air a cho-chur. a’ cleachdadh MonScript RTIIII Super Mix (Monad) a rèir stiùireadh an neach-dèanamh.
Chaidh fiosrachadh sreath CDS airson gine targaid G. duodenalis fhaighinn bhon NCBI GenBank.Cleachd Primer 5.0 gus primers clonaidh fuaigheil sònraichte a dhealbhadh airson gach gine targaid.Tha trì pàirtean anns a’ primer air adhart (5 ′-3 ′): sreath thar-tharraingeach le vectar sreathach pcDNA3.1 (+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) agus codons tòiseachaidh ATG agus GNN (mura h-eil a’ chiad bhunait G).Tha seo air a dhèanamh gus èifeachdas an abairt a leasachadh.A bharrachd air an sin, co-dhiù bunaitean 16 bp còmhla (susbaint GC 40–60% / Tm timcheall air 55 ° C).Tha an primer cùil (5 ′-3 ′) air a dhèanamh suas de dhà phàirt, sreath tar-tharraingeach le vectar sreathach EcoRV pcDNA3.1 (+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) agus bunait aonaichte de co-dhiù 16 bp.(ach a-mhàin an dà stad mu dheireadh).bunaitean) codon mar AA no GA gus leigeil le plasmids ath-chuingealaichte na pròtanan ainmichte aca a chuir an cèill).Tha na sreathan primer air an liostadh ann an Clàr 1 agus chaidh an co-chur le Kangmet Biotechnology Co., Ltd. (Changchun, Sìona).
Chaidh targaidean a mheudachadh le bhith a’ cleachdadh Pfu DNA polymerase (Tiangen, Beijing, Sìona) no Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, Sìona) a’ cleachdadh G. duodenalis cDNA ullaichte mar theamplaid.Chaidh an vectar abairt eukaryotic plasmid pcDNA3.1 (+) a shìneadh le enzyme cuibhreachaidh EcoRV agus dephosphorylated a ’cleachdadh Fast AP (Thermo Fisher Scientific).Chaidh pìosan sreathach pcDNA3.1 (+) agus mìrean gine targaid leudaichte a ghlanadh le bhith a’ cleachdadh pasgan glanaidh gel DNA (Tiangen) agus air an tomhas le bhith a’ cleachdadh Nanodrop ND-2000 (Thermo Fisher Scientific).Chaidh a’ chriomag pcDNA3.1 (+) agus gach criomag gine targaid ath-chur còmhla a’ cleachdadh measgachadh cloning cruinneachaidh singilte MonClone (Monad Biotech Co., Ltd., Suzhou, Sìona) agus air a dhearbhadh le sreath DNA a’ cleachdadh Comate Bioscience Company Limited (Changchun, Sìona)..
Chaidh plasmids gun endotoxin pcDNA3.1 (+) -alpha-2 agus pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 a chruthachadh a’ cleachdadh an Kit Mini Plasmid gun SanPrep Endotoxin (Sangon Biotech).Chaidh an dùmhlachd a chumail os cionn 500 ng / µl gus dèanamh cinnteach nach do chuir an EDTA anns a’ bhufair elution bacadh air a’ mheasadh gluasaid.Bha macrophages peritoneal luch bun-sgoile air an àiteachadh ann am pleitean 6-tobar le meadhan RPMI 1640 iomlan (Gnìomhachasan Bith-eòlasach) airson 12 uairean, an uairsin chaidh na ceallan a nighe 3 tursan ann am PBS blàth gus penicillin agus streptomycin a thoirt air falbh, agus an uairsin ann am meadhan le taic le meadhan iomlan.Chaidh plasmids gun endotoxin pcDNA3.1 (+) -alpha-2 agus pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 (2.5 μg) a lagachadh ann an 125 μl de mheadhan serum lùghdaichte Opti-MEM (Gibco, Thermo Fisher Scientific)..An uairsin chaidh 5 µl de ath-ghluasad gluasaid Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) a lagachadh ann an 125 µl de mheadhan serum Opti-MEM serum ìosal.Ullaich iom-fhilltean liposome-DNA le bhith a 'measgachadh an plasmid lag gun endotoxin le Lipofectamine 2000 agus a' leigeil leis a 'mheasgachadh seasamh aig teòthachd an t-seòmair airson 5 mionaidean.Cuir thairis na h-iom-fhilltean fa leth gu ceallan anns gach tobar agus measgachadh gu slaodach.Às deidh 4 uairean, chaidh 2 ml de mheadhan iomlan RPMI 1640 a chuir an àite meadhan cultar cealla agus lean cultar airson 24 uairean.Chaidh meadhan cultar cealla ùr a chur ris na ceallan agus a bhrosnachadh airson diofar amannan a rèir dealbhadh an assay.
Chaidh sampallan pròtain bho supernatants agus lysates cealla ullachadh mar a chaidh a mhìneachadh roimhe [25].B’ e paramadairean gluasaid membran airson pro-IL-1β, pro-caspase-1, caspase-1 p20, NLRP3, β-actin, agus His-tag 200 mA / 90 min.Airson interleukin 1β (IL-1β; R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, USA), caspase-1 (p20) (Adipogen, an Eilbheis) agus NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, an Eilbheis) agus 1:5000 ag amas air an taga aige (Amylet Scientific, Wuhan, Sìona) agus β-actin (Proteintech, Wuhan, Sìona).
Chaidh tar-cheangal le suberate disuccinimide (DSS) a dhèanamh mar a chaidh a mhìneachadh roimhe [26].Chaidh ceallan a nighe 3 tursan le PBS fuar agus an lìonadh gu tur le snàthad tomhais 27 ann am bufair freagairt 50 µl ASC (pH 8.0) anns an robh 25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES agus 125 mM NaHCO3.Chaidh am measgachadh a mheadhanachadh aig 5000 g airson 3 min agus chaidh am pellet a shùghadh le 10 µl DSS (25 mM ann an DMSO) agus bufair freagairt 40 µl ASC airson 30 min aig 37 ° C.Às deidh centrifugation aig 5000 g airson 10 min, chaidh am pellet a sgaoileadh ann am fuasgladh de 40 µl de bufair ath-bhualadh ASC agus 10 µl de bufair luchdachadh pròtain 6x (TransGen, Beijing, Sìona), agus an uairsin chaidh am fuasgladh a chuir às aig teòthachd an t-seòmair airson 15 min., An uairsin boil 10 mionaidean.Chaidh sampallan pròtain an uairsin a chuir gu blotting an Iar a’ cleachdadh prìomh antibodies an-aghaidh ASC (Wanleibio, Shenyang, Sìona) aig co-mheas caolachaidh de 1:500.
Às deidh modh-obrach a chaidh a mhìneachadh roimhe [13], chaidh supernatants cultar cealla a bhuain agus chaidh secretion den cytokine pro-inflammatory IL-1β a dhearbhadh le bhith a’ cleachdadh an luchag IL-1 pasgan Beta ELISA (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific).Tionndaidh luachan OD450nm gu dùmhlachdan pròtain a’ cleachdadh an lùb àbhaisteach IL-1β.
Chaidh ceallan còmhdaichte air còmhdach-chòmhdaich a nighe gu socair 3 tursan ann am PBS blàth, stèidhichte ann an inneal cealla clò (Biosharp, Beijing, Sìona) airson 10 mion aig teòthachd an t-seòmair (RT), ann an 0.1% Triton X-Permeabilize aig 100 (air a lagachadh ann am PBS; Biosharp; ) airson 20 mionaid aig teòthachd an t-seòmair agus cuir stad air ann an 5% serum albumin bò (ann am PBS) airson 2 uair aig teòthachd an t-seòmair.Chaidh ceallan an uairsin a thoirt a-steach thar oidhche aig 4 ° C le bun-antibodies an aghaidh ASC (1: 100 caolachadh) no NLRP3 (1: 100 caolachadh), fa leth, agus Cy3 le bileagan gobhar anti-rabbit IgG (H + L) (1: 400; EarthOx , San Francisco, CA, na SA) no IgG an-aghaidh gobhar co-cheangailte FITC (1: 400; Earthox) thar oidhche aig 37 ° C anns an dorchadas airson 1 uair.Chaidh na niuclasan a dhath le Hoechst 33258 (10 μg / ml; UE, Suzhou, Sìona) airson 5 mionaidean agus chaidh am faicinn fo mhiocroscop flùraiseach (Olympus Corporation, Tokyo, Iapan).
Chaidh luchagan a roinn ann an ceithir buidhnean (n = 7 anns gach buidheann): (i) Buidheann smachd àicheil air a làimhseachadh le PBS (PBS a-mhàin; gavage 100 µl / luchag PBS air a leantainn le in-stealladh intraperitoneal làitheil 100 µl / luchag PBS 3 uairean às deidh sin)., gu leantainneach airson 7 latha);(ii) buidheann smachd àicheil air a làimhseachadh le neach-dìon MCC950 [27] (100 µl / luchag tro gavage PBS, 3 uairean às deidh sin, chaidh cuideam bodhaig 10 mg / kg [BW] MCC950 [ann am PBS] a thoirt seachad intraperitoneally gach latha, fad 7 latha);(iii) Buidheann gabhaltachd cyst duodenalis G. (1.5 x 106 cysts/luchag le gavage, 3 uairean nas fhaide air adhart, 100 μl/luchag PBS air a thoirt seachad gu h-eadar-peritoneally gach latha airson 7 latha);(iv) G. duodenalis cyst còmhla buidheann gabhaltachd buidheann làimhseachaidh inhibitor MCC950 (1.5 × 106 cysts / luchag tro gavage, cuideam bodhaig 10mg / kg MCC950 intraperitoneally gach latha airson 7 latha aig 3h).Bhathas a’ cumail sùil air cuideam bodhaig gach luchag gach latha agus chaidh na luchagan uile a chuir gu bàs air an 7mh latha.Chaidh duodenum buain (fad 3 cm) a ghearradh ann am pìosan beaga ann an 1 ml PBS, chaidh cysts a sgrios thar oidhche ann am PBS aig 4 ° C, agus G. duodenalis trophozoites.Chaidh duodenum ùr (fad 1 cm) a sgaradh airson staining hematoxylin agus eosin (H&E).
Chaidh luchagan a roinn ann an dà bhuidheann: (i) buidheann smachd MOCK agus (ii) buidheann dìon MCC950.Bha còig leigheasan anns gach buidheann (n = 7 / buidheann làimhseachaidh): (i) Buidheann smachd àicheil làimhseachadh PBS (PBS a-mhàin; 100 µl / luchag PBS, in-stealladh intramuscular (IM) (tibialis anterior) [28, 29] ;( ii) pcDNA3.1(+) buidheann smachd àicheil plasmid (100 µg/DNA luchag, tro in-stealladh intramuscular); (iii) buidheann smachd dearbhach gabhaltachd cyst duodenalis (1.5 x 106 cysts/luchag, tro ghleus) (iv) a buidheann air a làimhseachadh le plasmid pcDNA3.1 (+) -alpha-2 (100 μg / luchag DNA, le in-stealladh intramuscular), agus (v) buidheann air a làimhseachadh le plasmid pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 (100 µg / luchag DNA, às deidh 12 uair de thrannsa, fhuair luchagan anns a’ bhuidheann dìon MCC950 in-stealladh intraperitoneal làitheil de MCC950 (cuideam bodhaig 10 mg / kg) airson 7 latha, agus fhuair luchagan anns a’ bhuidheann MOCK tomhas co-ionann de làimhseachadh PBS. air an cruinneachadh bho luchagan nam ball-sùla agus air am fàgail thar oidhche aig 4 ° C.
Chaidh trithead ’s a còig luchainn a roinn ann an còig buidhnean (n=7/buidheann).B’ e buidheann smachd àicheil a bh’ ann am Buidheann 1 air a làimhseachadh le PBS: fhuair luchagan 100 μl de PBS intramuscularly agus 3 latha às deidh sin le gavage.'S e buidheann smachd dearbhach a th' ann am Buidheann 2 air a bheil galar G. duodenalis cysts: chaidh luchainn a thoirt a-steach le 100 μl de PBS, agus 3 latha às dèidh sin chaidh 1.5 x 106 cysts/luchag a thoirt a-steach gu h-inntinneach.An treas buidheann - banachdach plasmid le pcDNA3.1 (+) ann an co-bhonn ri buidheann smachd airson galar cyst duodenal: fhuair luchagan 100 μg de DNA plasmid pcDNA3.1 (+)(im) beòil, cysts 1.5 × 106 / luchag 3 airson grunn làithean.B' e buidhnean 4 agus 5 ath-chuartachadh pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine plasmid no pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine plasmid còmhla ri galar G. duodenalis cyst.Buidheann deuchainneach: fhuair luchagan 100 µg de pcDNA3.1 (+) - giardine plasmid DNA (im), an uairsin 3 latha às deidh sin, chaidh 1.5 × 106 cysts / luchag a chuir a-steach tro ghavage.Chaidh sùil a chumail air cuideam bodhaig gach luchag às deidh don chiste G. duodenalis a thoirt a-steach tron ​​​​tiùb.Chaidh duodenum ùr a chruinneachadh airson tomhas luchdan dìosganach agus mion-sgrùdadh staining HE.
Chaidh atharrachaidhean histopathological a sgrùdadh a rèir modh a chaidh fhoillseachadh roimhe [30].Chaidh duodenum ùr a shuidheachadh le inneal cealla clò, freumhaichte ann am paraffin, air a ghearradh ann an earrannan 4 μm, air a dhath le H&E agus air a sgrùdadh fo mhiocroscop aotrom.Chaidh atharrachaidhean pathological riochdachail ann an seachd earrannan clò bho sheachd luchainn neo-eisimeileach a mheasadh le eòlaiche-eòlaiche nach robh eòlach air an làimhseachadh agus chaidh an glacadh aig àrdachadh 200x.Chaidh fad an villi agus doimhneachd nan crypts a thomhas a rèir nan dòighean a chaidh a mhìneachadh roimhe.
Chaidh toraidhean in vitro agus in vivo fhaighinn ann an trì-fhillte.Chaidh grafaichean a chruthachadh a’ cleachdadh GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA).Chaidh eadar-dhealachaidhean eadar dà bhuidheann a sgrùdadh le t-test, fhad ‘s a chaidh eadar-dhealachaidhean eadar buidhnean ≥3 a sgrùdadh le mion-sgrùdadh aon-shligheach air caochlaideachd (ANOVA) a’ cleachdadh bathar-bog SPSS (dreach 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA).Chaidh dàta a sgrùdadh airson co-sheòrsachd caochlaidheachd a’ cleachdadh deuchainn Levene agus an uairsin deuchainn post hoc Bonferroni (B).Tha cudromachd air a chur an cèill mar P <0.05, P <0.01, agus P <0.001 (chan eil e cudromach [ns]) (P>0.05).
Sheall ar mion-sgrùdadh roimhe air proteomics GEV ann an Leabhar mòr-eòlais Kyoto de Genes and Genomes (KEGG) gum faodadh mòran thargaidean a bhith an sàs ann a bhith a’ cur an gnìomh slighean comharran sèid [13].Thagh sinn dà thargaid gealltanach, alpha-2 agus alpha-7.3 giardins, leudaich na moileciuilean sin agus cleachd iad gus an vectar abairt eukaryotic pcDNA3.1 (+) a thogail.Às deidh an t-sreath, chaidh plasmids abairtean abairtean ath-leasaichte pcDNA3.1 (+)-alpha-2 agus alpha-7.3 giardine a thionndadh gu macrophages peritoneal luch bun-sgoile, agus chaidh am pròtain soidhnidh caspase-1 p20 de shèid (criogadh de caspase-1 gnìomhaichte) a chomharrachadh. mar a bhith a’ soilleireachadh prìomh mholacilean a dh’ fhaodadh sèid a bhrosnachadh.Sheall na toraidhean gum faod giardines alpha-2 agus alpha-7.3 abairt p20 caspase-1 a bhrosnachadh coltach ri GEV.Cha deach buaidh sam bith air gnìomhachd caspase-1 a lorg anns an smachd àicheil gun làimhseachadh (PBS a-mhàin) agus smachd plasmid pcDNA3.1 (+) (Figear 1).
Tomhais gnìomhachd p20 caspase-1 le pcDNA3.1 (+) -alpha-2 agus alpha-7.3 giardins.Chaidh plasmids abairt eukaryotic ath-leasaichte pcDNA3.1 (+) -alpha-2 agus alpha-7.3 giardines (os cionn gach sreath) a thionndadh gu macrophages peritoneal luchag bun-sgoile agus chaidh supernatants cultair a bhuain 24 uairean às deidh sin.Chaidh blotadh an iar a chleachdadh gus ìrean faireachdainn den phròtain inflammasome caspase-1 p20 ainm-sgrìobhte a thomhas.Chaidh am buidheann làimhseachaidh PBS a-mhàin (sreath C) agus am buidheann monotherapy pcDNA3.1 (+) (sreath pcDNA3.1) a chleachdadh mar smachd àicheil, agus chaidh am buidheann làimhseachaidh GEV a chleachdadh mar smachd adhartach.Chaidh cur an cèill a’ phròtain ath-chuingealaichte a dhearbhadh le bhith a’ lorg taga histidine anns gach pròtain, agus b’ e na bannan pròtain ris an robh dùil alpha-2 giardine (38.2 kDa) agus alpha-7.3 giardine (37.2 kDa).GEV, bileagan extracellular Giardia duodenum, pcDNA3.1 (+), vectar sreathach EcoRV, SUP, supernatant
Gus faighinn a-mach a bheil alpha-2 giardine agus alpha-7.3 giardine a’ toirt a-steach abairt p20 caspase-1 agus a’ gabhail pàirt ann a bhith a’ cur an gnìomh freagairt sèidteach NLRP3 aoigheachd, pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine agus pcDNA3.1 (+) -alpha Chaidh -7.3 giardin a thionndadh gu macrophages peritoneal luch bun-sgoile le DNA plasmid ath-leasaichte, agus chaidh ìrean faireachdainn, sgìreachadh, agus oligomerization de na prìomh phròtainean inflammatory NLRP3 a dhearbhadh.Anns an deuchainn seo, chaidh GEV a chleachdadh mar a’ bhuidheann smachd adhartach, agus b’ e am buidheann làimhseachaidh gun làimhseachadh (PBS a-mhàin) no am buidheann làimhseachaidh tar-chuir pcDNA3.1 (+) am buidheann àicheil.Sheall na toraidhean, mar a bha anns a’ bhuidheann GEV, gun do dh’ adhbhraich DNA plasmid ath-chuimseach de giardin pcDNA3.1 (+) -alpha-2 agus giardin pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 gu bhith a’ riaghladh suas NLRP3, pro-IL-1β agus gnìomhachadh procaspase-1 agus caspase-1 (Fig. 2a).A bharrachd air an sin, dh’adhbhraich an dà giardines secretion IL-1β cudromach (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; alpha-2 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0007 ).;alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P <0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (Figear 2b).Bha a’ mhòr-chuid de phròtainean ASC monomeric anns a’ bhuidheann gun làimhseachadh no anns a’ bhuidheann làimhseachaidh a chaidh a ghluasad leis a’ pcDNA3.1 (+) plasmid, an taca ri pcDNA3.1 (+) -alpha-2 no pcDNA3.1 (+) -alpha- 7.3 giardine.Thachair oligomerization ASC anns an DNA plasmid ath-leasaichte den bhuidheann no buidheann smachd adhartach GEV, a’ sealltainn cruth oligomeric (Figear 2c).Tha an dàta tòiseachaidh seo a’ moladh gum faod alpha-2 giardine agus alpha-7,3 giardine gnìomhachd sèid NLRP3 a bhrosnachadh.Sheall sgrùdaidhean immunofluorescent às deidh sin air sgìreachadh ASC agus NLRP3, anns a’ bhuidheann smachd àicheil, gu robh am pròtain ASC sgapte air feadh an cytoplasm agus nochd e mar chomharradh dot air brosnachadh pcDNA3.1 (+) -alpha-2 le giardine no pcDNA3.1 (+) -alpha-7,3 buidheann giardine no buidheann smachd adhartach GEV (Figear 2d).Anns na buidhnean smachd àicheil agus pcDNA 3.1 air a làimhseachadh le plasmid, cha deach comharra pròtain NLRP3 a lorg, fhad ‘s a bha dot comharra flùraiseach mar fhreagairt do pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine no pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 chaidh a lorg..lorgar giardine anns an cytoplasm no nuair a bhrosnaicheas an HEV (Fig. 2e).Tha an dàta seo a’ sealltainn tuilleadh gu bheil G. duodenalis giardin alpha-2 agus giardin alpha-7.3 a’ gnìomhachadh an inflammasome NLRP3 ann am macrophages peritoneal bun-sgoile na luchaige.
pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardin agus pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardin an gnìomh NLRP3 inflammasome ann am macrophages peritoneal luch.Atharraich an abairt eukaryotic ath-leasaichte plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardin agus pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardin gu macrophages agus ceallan peritoneal murine bun-sgoile, no buain an supernatant taobh a-staigh 24 h airson mion-sgrùdadh faireachdainn, oligomerization , dìomhaireachd.agus sgìreachadh prìomh phròtainean sèid.Chaidh a’ bhuidheann PBS-a-mhàin (C) agus am buidheann làimhseachaidh singilte pcDNA3.1 (+) a chleachdadh mar an smachd àicheil, agus chaidh am buidheann làimhseachaidh GEV a chleachdadh mar a’ bhuidheann adhartach.a Chaidh prìomh phròtainean inflammatory NLRP3, a’ toirt a-steach NLRP3, pro-IL-1β, pro-caspase-1, agus p20 caspase-1, a lorg le blotting an Iar.b Chaidh ìrean secretion IL-1β anns na supernatants a dhearbhadh le bhith a’ cleachdadh assay immunosorbent ceangailte le enzyme (ELISA).Chaidh eadar-dhealachaidhean eadar buidhnean smachd agus deuchainneach a sgrùdadh le mion-sgrùdadh aon-shligheach air caochlaideachd (ANOVA) a’ cleachdadh dreach bathar-bog SPSS 22.0.Tha rionnagan a’ nochdadh eadar-dhealachaidhean mòra eadar buidhnean **P<0.01 agus ***P<0.001.c Chaidh ìrean oligomerization ASC ann am cruinneagan a dhearbhadh le mion-sgrùdadh tar-cheangail DSS, agus chaidh ìrean ASC ann an lysates cealla a chleachdadh mar smachd luchdachadh.d Amharc air sgìreachadh ISC a’ cleachdadh immunofluorescence.e Chaidh immunofluorescence a chleachdadh gus sealladh a dhèanamh air sgìreachadh NLRP3.ASC, pròtain coltach ri speck apoptotic;IL, eadarleukin ;NLRP3, nucleotide-ceangail oligomerization coltach ri gabhadan 3;ns, gun a bhith cudromach (P> 0.05)
Bidh an dà chuid G. duodenalis agus na GEVs a tha e a’ falach a’ cur an gnìomh an NLRP3 inflammasome agus a’ riaghladh freagairtean sèidteach aoigheachd in vitro.Mar sin, tha àite an NLRP3 inflammasome ann an pathogenicity G. duodenalis fhathast neo-shoilleir.Gus sgrùdadh a dhèanamh air a’ chùis seo, dhealbhaich sinn deuchainn eadar luchagan air an robh galair G. duodenalis cyst agus luchagan air an robh làimhseachadh inhibitor G. duodenalis cyst + MCC950 agus rinn sinn coimeas eadar abairt inflammasome NLRP3 nuair a bha iad air an galar le cyst G. duodenalis.Tha sgeama mionaideach den deuchainn ri fhaicinn ann am Fig. 3a.Chaidh sùil a chumail air atharrachaidhean ann an cuideam bodhaig luchainn ann am buidhnean làimhseachaidh eadar-dhealaichte airson 7 latha às deidh galar le cysts, agus tha na toraidhean air an sealltainn ann am Fig. 3b.An coimeas ris a 'bhuidheann a chaidh a làimhseachadh le PBS fìor-ghlan, sheall na toraidhean gu robh (i) cuideam corp luchainn le galar G. duodenalis sìos bho latha 3 gu latha 7 an dèidh galar;(ii) cha robh buaidh mhòr aig làimhseachadh leis an neach-dìon MCC950 air cuideam bodhaig nan luchagan..An coimeas ris a’ bhuidheann gabhaltachd singilte, lùghdaich am BW den bhuidheann galair duodenal a chaidh a làimhseachadh le MCC950 gu diofar ìrean (Latha 1: ANOVA, F (3, 24) = 1.885, P = 0.0148; Latha 2: ANOVA, F ( 3, 24) ) = 0.4602, P <0.0001; Latha 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; Latha 4: ANOVA, F(3, 24) = 1.683, P = 0.0052; (3, 24) = 0.6497, P = 0.0645; Latha 6: ANOVA, F(3, 24) = 5.457, P = 0.0175; Latha 7: ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202).Tha an dàta seo a 'sealltainn gu bheil an NLRP3 inflammasome a' dìon luchainn bho chall cuideam mòr anns na tràth ìrean (2-4 latha) de ghalar duodenal.Bha sinn an uairsin ag amas air G. duodenalis trophozoites a lorg ann an lionn lavage duodenal agus tha na toraidhean air an sealltainn ann am Figear 3c.An coimeas ris a’ bhuidheann gabhaltachd cyst G. duodenalis, mheudaich an àireamh de trophozoites anns an duodenum gu mòr às deidh dha bacadh a chuir air an NLRP3 inflammasome (t (12) = 2.902, P = 0.0133).Sheall nèapraigean duodenal air an dath le HE, an coimeas ri smachd àicheil air a làimhseachadh le PBS agus MCC950 a-mhàin: (i) Mar thoradh air galar G. duodenalis cyst milleadh air an duodenal villi (ANOVA, F (3, 24) = 0.4903, P = 0.0488 ) agus atrophy crypt (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) duodenum bho luchainn le galair G. duodenalis agus air an làimhseachadh le luchd-bacadh MCC950.chaidh villi duodenal a mhilleadh agus marbh (ANOVA, F (3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) le meuran atrophy agus crypt (ANOVA, F (3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (Fig. 3d- f) .Tha na co-dhùnaidhean sin a’ moladh gu bheil pàirt aig an inflammasome NLRP3 ann a bhith a’ lughdachadh pathogenicity G. duodenalis.
Dreuchd NLRP3 inflammasome ann an galar Giardia duodenum.Bha luchagan air an giùlan (iv) le cysts duodenococcal agus an uairsin air an làimhseachadh le no às aonais MCC950 (ip).Chaidh buidhnean làimhseachaidh singilte le PBS no MCC950 a chleachdadh mar smachdan.Buidheann deuchainneach agus siostam làimhseachaidh.b Chaidh sùil a chumail air cuideam bodhaig luchainn anns gach aon de na diofar bhuidhnean làimhseachaidh airson 7 latha.Chaidh an eadar-dhealachadh eadar buidheann galair G. duodenalis agus buidheann làimhseachaidh galair G. duodenalis + MCC950 a sgrùdadh le deuchainn-t a’ cleachdadh dreach bathar-bog SPSS 22.0.Tha rionnagan a’ nochdadh eadar-dhealachaidhean mòra aig *P<0.05, **P<0.01, no ***P<0.001.c Chaidh eallach parasitic a dhearbhadh le bhith a’ cunntadh an àireamh de trophozoites ann an lionn lavage duodenal.Chaidh an eadar-dhealachadh eadar buidheann galair G. duodenalis agus buidheann làimhseachaidh galair G. duodenalis + MCC950 a sgrùdadh le deuchainn-t a’ cleachdadh dreach bathar-bog SPSS 22.0.Tha rionnagan a’ nochdadh eadar-dhealachaidhean mòra aig *P <0.05.d Toraidhean staining hematoxylin agus eosin (H&E) de histopathology duodenal.Tha saighdean dearga a 'comharrachadh milleadh air an villi, tha saighdean uaine a' comharrachadh milleadh air na criosan.Bàr sgèile: 100 µm.e, f Mion-sgrùdadh staitistigeil air àirde villus duodenal agus àirde criomag na luchaige.Tha rionnagan a’ nochdadh eadar-dhealachaidhean mòra aig *P<0.05 agus **P<0.01.Tha na toraidhean air an toirt bho 7 deuchainnean bith-eòlasach neo-eisimeileach.BW, cuideam corp;ig, slighe lìbhrigidh intragastric;ip, slighe lìbhrigidh intraperitoneal;ns, gun a bhith cudromach (P> 0.05);PBS, saline buffered fosfáit;WT, seòrsa fiadhaich
Tha an secretion de IL-1β na chomharradh air gnìomhachd sèid.Gus faighinn a-mach a bheil G. duodenalis alpha-2 giardine agus alpha-7.3 giardine a ’gnìomhachadh an aoigheachd NLRP3 inflammasome in vivo, chleachd sinn luchagan WT gun làimhseachadh (buidheann sham) agus luchagan le bacadh inflammasome NLRP3 (buidheann làimhseachaidh bacaidh MCC950).Tha sgeama mionaideach den deuchainn ri fhaicinn ann am Fig. 4a.Bha buidhnean deuchainneach a’ gabhail a-steach luchagan air an làimhseachadh le PBS, làimhseachadh cyst G. duodenalis le gavage, in-stealladh intramuscular de pcDNA3.1, agus in-stealladh intramuscular de pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine no pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine.Air an 7mh latha às deidh rianachd intramuscular den plasmid ath-chuingealaichte, chaidh serum a chruinneachadh agus chaidh an ìre IL-1β anns gach buidheann a dhearbhadh.Mar a chithear ann am Figear 4b, anns a 'bhuidheann MOCK: (i) an coimeas ris a' bhuidheann PBS, cha robh buaidh mhòr aig làimhseachadh pcDNA3.1 air secretion IL-1β (ANOVA, F (4.29) = 4.062, P = 0.9998), ge-tà, Chaidh secretion IL-β àrdachadh gu mòr anns a 'bhuidheann G. duodenalis cyst (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine agus pcDNA3.1- Mheudaich in-stealladh intramuscular de alpha-7.3 giardine ìrean serum IL-1β gu mòr (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P <0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 ìrean àrda de secretion IL -1β air a bhrosnachadh anns a 'bhuidheann stealladh intramuscular pcDNA3.1-alpha-2 giardine (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.0333) .An coimeas ri gach buidheann anns a 'bhuidheann leigheis MCC950 agus a' bhuidheann MOCK: (i) Lùghdaich ìrean secretion IL-1β anns a 'bhuidheann smachd PBS agus am buidheann smachd pcDNA3.1 gu ìre gu ìre às deidh dhaibh bacadh a chur air bacadh MCC950, ach cha robh an diofar ann. cudromach (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) às deidh MCC950 a bhacadh., chaidh secretion IL-1β a lughdachadh gu mòr anns a’ bhuidheann G. duodenalis le galair cyst, am buidheann giardine pcDNA3.1-alpha-2, agus am buidheann giardine pcDNA3.1-alpha-7.3 (G. duodenalis: ANOVA, F (9). , 58) = 3.540 , P = 0.0120; pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.0447; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(9, ) = 3.540, P = 0.0164).Tha na co-dhùnaidhean sin a 'moladh gu bheil alpha-2 giardine agus alpha-7.3 giardine a' toirt buaidh air gnìomhachadh an NLRP3 inflammasome in vivo.
pcDNA3.1(+)-giardines an gnìomh an aoigheachd NLRP3 inflammasome in vivo.Fhuair luchagan a’ bhanachdach (IM) le abairt eukaryotic ath-leasaichte plasmid pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine no pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine agus an uairsin air an làimhseachadh le MCC950 (ip; buidheann MCC950) no nach robh (buidheann meallta ).Chaidh am buidheann làimhseachaidh plasmid PBS no pcDNA3.1(+) a chleachdadh mar smachd àicheil, chaidh buidheann làimhseachaidh cyst G. duodenalis a chleachdadh mar smachd adhartach.Buidheann deuchainneach agus siostam làimhseachaidh.b Chaidh ìrean serum de IL-1β ann an luchagan a thomhas air latha 7 le assay ELISA.Chaidh mion-sgrùdadh a dhèanamh air eadar-dhealachaidhean eadar buidhnean anns a’ bhuidheann MOCK a’ cleachdadh ANOVA aon-shligheach, agus chaidh eadar-dhealachaidhean eadar a’ bhuidheann MOCK agus a’ bhuidheann MCC950 a sgrùdadh a’ cleachdadh an t-deuchainn de dreach bathar-bog SPSS 22.0.Tha rionnagan a’ nochdadh eadar-dhealachaidhean mòra eadar buidhnean làimhseachaidh anns a’ bhuidheann MOCK, *P <0.05 agus ***P<0.001;tha comharran dolar ($) a’ nochdadh eadar-dhealachaidhean mòra eadar gach buidheann sa bhuidheann MOCK agus a’ bhuidheann MCC950 aig P<0.05.Toraidhean seachd deuchainnean bith-eòlasach neo-eisimeileach.i, in-stealladh intramuscular, ns, gun a bhith cudromach (P> 0.05)
Gus sgrùdadh a dhèanamh air buaidh gnìomhachd alpha-2 agus alpha-7.3 giardine-mediated an neach-aoigheachd NLRP3 inflammasome air gabhaltachd G. duodenalis, chleachd sinn luchagan WT C57BL/6 agus chuir sinn a-steach alpha-2 giardine agus alpha-7.3 giardine.chaidh am plasmid a chuir a-steach gu intramuscularly, às deidh 3 latha tro phìob gastric den G. duodenalis cyst, às deidh sin chaidh na luchagan fhaicinn airson 7 latha.Tha sgeama mionaideach den deuchainn ri fhaicinn ann am Fig. 5a.Chaidh cuideam bodhaig gach luchag a thomhas a h-uile latha, chaidh sampallan de stuth duodenal ùr a chruinneachadh air an 7mh latha às deidh rianachd tro phìob gastric, chaidh an àireamh de trophozoites a thomhas, agus chaidh atharrachaidhean histopathological fhaicinn.Mar a chithear ann am Figear 5b, le barrachd ùine beathachaidh, mheudaich BW luchagan anns gach buidheann mean air mhean.Thòisich an MT de luchainn a ‘dol sìos air an 3mh latha às deidh rianachd intragastric de G. duodenalis cysts, agus an uairsin àrdachadh mean air mhean.Chuir gnìomhachd an inflammasome NLRP3 air adhbhrachadh le in-stealladh intramuscular de alpha-2 giardine agus alpha7.3 giardine gu mòr call cuideim ann an luchagan (Latha 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 1.399, P). = 0 .9754 Latha 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 1.399, P = 0.9987 Latha 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F ( 4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; Latha 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409; Latha 3: pcDNA3.1-alpha-2 giardine (, ANOVA, 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 Latha 3: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4 , 30) = 0.8222, P = 0.0083; Latha 4: pcDNA3.1-alpha-2 giardine , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, Latha 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P <0.0001, Latha 5: pcDNA3.1-alpha - 2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Latha 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Latha 6: pcDNA3 . alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, Latha 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;Latha 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P <0.0001 Latha 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4 , 30) = 0.5369, P <0.0001).Chaidh an luchd dìosganach a mheasadh anns an duodenum (Fig. 5c).An coimeas ris an smachd adhartach gun làimhseachadh agus a’ bhuidheann a chaidh a chuir a-steach leis an vectar pcDNA3.1 falamh, chaidh an àireamh de G. duodenalis trophozoites a lughdachadh gu mòr anns na buidhnean a chaidh an stealladh le α-2 giardine agus α-7,3 giardine (pcDNA3.1-alpha -2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P <0.0001).A bharrachd air an sin, bha giardine alfa-7.3 nas dìonaiche ann an luchagan na giardine alfa-2 (ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P = 0.0081).Tha toraidhean staining HE air an sealltainn ann am fige.5d - f.Bha nas lugha de lotan maothraidh duodenal aig luchagan a chaidh an stealladh le alpha-2 giardine agus alpha-7.3 giardine, air am foillseachadh le milleadh villus, an coimeas ri luchagan air an stealladh le G. duodenalis agus luchagan air an stealladh le G. duodenalis an co-bhonn ri vectar pcDNA3 falamh .1 Zoom.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 no P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0028 no P = 0.0055) agus atrophy crypt lùghdaichte (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 1.470, P = 0.0264 no P = 0.0158; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: , F(3, 24) = 1.470, P = 0.0371 no P = 0.0191).Tha na co-dhùnaidhean sin a’ moladh gu bheil alpha-2 giardine agus alpha-7,3 giardine a’ lughdachadh gabhaltachd G. duodenalis le bhith a’ gnìomhachadh an NLRP3 inflammasome in vivo.
Dleastanas pcDNA3.1(+)-giardins ann an galar G. duodenalis.Fhuair luchainn a’ bhanachdach (IM) le abairt eukaryotic ath-leasaichte plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine no pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine agus an uairsin chaidh dùbhlan a thoirt dhaibh le cysts G. duodenalis (ig).Chaidh am buidheann PBS agus am buidheann làimhseachaidh cyst duodenal pcDNA3.1 (+) a chleachdadh mar bhuidhnean smachd àicheil, agus chaidh am buidheann làimhseachaidh cyst duodenal a chleachdadh mar bhuidheann smachd adhartach.Buidheann deuchainneach agus siostam làimhseachaidh.b Chaidh sùil a chumail air MT luchagan anns gach aon de na diofar bhuidhnean làimhseachaidh airson 7 latha às deidh an dùbhlan.Tha rionnagan a’ nochdadh eadar-dhealachaidhean mòra eadar buidhnean sa bhuidheann G. duodenalis agus am buidheann pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine, *P <0.05, **P <0.01, agus ***P <0.001;tha soidhne an dolar ($) a’ nochdadh eadar-dhealachadh mòr eadar gach buidheann de G. duodenalis agus am buidheann pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 jardine, $$P<0.01 agus $$$P<0.001.c Chaidh luchd parasitic a dhearbhadh le bhith a’ cunntadh an àireamh de trophozoites ann an 1 ml de shlaodadh duodenal bhon duodenum (3 cm a dh’ fhaid) agus air a chuir an cèill mar an àireamh de dhìosganaich gach cm de duodenum.Chaidh eadar-dhealachaidhean eadar buidheann galair G. duodenalis, am buidheann pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine, agus am buidheann pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine a sgrùdadh le ANOVA aon-shligheach a’ cleachdadh dreach bathar-bog SPSS 22.0.Tha rionnagan a’ nochdadh eadar-dhealachaidhean mòra aig **P<0.01 agus ***P<0.001.d Atharrachaidhean histopathological anns an duodenum.Tha saighdean dearga a 'comharrachadh milleadh air an villi, tha saighdean uaine a' comharrachadh milleadh air na criosan.Bàr sgèile: 100 µm.e, f Mion-sgrùdadh staitistigeil air àirde villus duodenal luch (e) agus àirde crypt (f).Chaidh eadar-dhealachaidhean eadar buidhnean ann am Figear 1d a sgrùdadh le ANOVA aon-shligheach a’ cleachdadh dreach bathar-bog SPSS 22.0.Tha rionnagan a’ nochdadh eadar-dhealachaidhean mòra aig *P<0.05 agus **P<0.01.Toraidhean seachd deuchainnean bith-eòlasach neo-eisimeileach.ns, gun a bhith cudromach (P> 0.05)
Tha Giardia duodenum na dhìosganach intestinal ainmeil de dhaoine agus mamalan eile a tha ag adhbhrachadh giardiasis.Ann an 2004, chaidh a ghabhail a-steach ann an Iomairt Galaran dearmadach WHO air sgàth cho tric ‘s a bha e thar 6 bliadhna, gu sònraichte ann an coimhearsnachdan le inbhe sòisio-eaconamach ìosal [32].Tha àite deatamach aig an t-siostam dìon dhùthchasach anns an fhreagairt dìon do ghalar G. duodenalis.Thathas ag aithris gu bheil macrophages na luchaige a’ glacadh agus a’ marbhadh G. duodenalis le bhith a’ leigeil a-mach ribeachan extracellular [33].Tha na sgrùdaidhean a rinn sinn roimhe air sealltainn gu bheil G. duodenalis, parasite extracellular neo-ionnsaigheach, a 'gnìomhachadh p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, agus slighean comharran sèididh NLRP3 ann am macrophages luch gus freagairtean sèididh aoigheachd a riaghladh, agus dh'fhaodadh GEV a leigeil ma sgaoil am pròiseas seo a neartachadh.13], 24].Ach, tha na dearbh PAMPn a tha an sàs ann an sèid air a riaghladh le NLRP3 ann an GEV agus àite inflammasome NLRP3 ann an giardiasis fhathast ri shoilleireachadh.Gus solas a thoirt air an dà cheist seo, rinn sinn an sgrùdadh seo.
Tha an inflammasome NLRP3 suidhichte ann an cytoplasm cheallan dìon agus faodar a chuir an gnìomh le grunn ghràineanan leithid criostalan searbhag uric, tocsainnean, bacteria, bhìorasan, agus dìosganaich.Ann an sgrùdaidhean bactaraidh, chaidh toxins a chomharrachadh mar phrìomh PAMPan a bhios a 'gnìomhachadh mothachaidhean sèididh, a' leantainn gu sèid agus bàs cealla [34].Bidh cuid de tocsainnean structarail eadar-mheasgte, leithid hemolysin bho Staphylococcus aureus [35] agus Escherichia coli [36], hemolysin BL (HBL) bho enterotoxin (NHE) [37], ag adhbhrachadh gnìomhachd sèid NLRP3.Tha sgrùdaidhean bhìorasach air sealltainn gu bheil pròtanan fòirneart leithid pròtain cèis SARS-COV-2 (E) [38] agus pròtain bhìoras Zika NS5 [39] nam PAMPan cudromach a tha aithnichte leis an gabhadair NLRP3.Ann an sgrùdaidhean parasite, chaidh aithris gu bheil mòran de dhìosganaich co-cheangailte ri gnìomhachd inflammasome aoigheachd, leithid Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis [40], Trypanosoma cruzi [41], agus Leishmania [42].Tha feum air na pròtanan dùmhail granule GRA35, GRA42, agus GRA43, co-cheangailte ri fòirneart Toxoplasma gondii, airson inntrigeadh pyroptosis ann am macrophages radan Leòdhais [43].A bharrachd air an sin, tha cuid de sgrùdaidhean Leishmania air fòcas a chuir air moileciuilean fa leth a tha an sàs anns an NLRP3 inflammasome, leithid parasite membrane lipophosphoglycan [44] no sinc metalloprotease [45].Am measg an teaghlaich de ghinean alpha-giardin coltach ri annexin, thathas air sealltainn gu bheil alpha-1 giardin na thagraiche banachdach a dh’ fhaodadh a bhith a ’toirt seachad dìon an aghaidh G. duodenalis ann am modail luchag [18].Anns an sgrùdadh againn, thagh sinn G. duodenalis virulence factaran alpha-2 agus alpha-7,3 giardines, a tha gun samhail airson giardia ach gu ìre nas lugha air aithris.Chaidh an dà ghine targaid seo a chlò-bhualadh a-steach don vectar siostam faireachdainn eukaryotic pcDNA3.1 (+) airson mion-sgrùdadh air gnìomhachd sèid.
Anns a’ mhodail luch againn, tha mìrean caspase sgoltadh nan comharran air gnìomhachd sèid.Nuair a thèid a bhrosnachadh, bidh NLRP3 ag eadar-obrachadh le ASC, a’ fastadh procaspases, agus a’ gineadh caspases gnìomhach a bhios a’ ceangal pro-IL-1β agus pro-IL-18 a-steach gu IL-1β aibidh agus IL-18, fa leth -18.Tha caspases inflammatory (caspases-1, -4, -5 agus -11) nan teaghlach glèidhte de proteases cysteine ​​​​a tha deatamach airson dìon gnèitheach agus a tha an sàs ann an sèid agus bàs cealla prògramaichte [46].Tha Caspase-1 air a ghnìomhachadh le inflammasomes canonical [47], fhad ‘s a tha caspases-4, -5, agus -11 air an glanadh nuair a thèid inflammasomes aitigeach a chruthachadh [48].Anns an sgrùdadh seo, chleachd sinn macrophages peritoneal luch mar mhodail agus rinn sinn sgrùdadh air p20 caspase-1 cleaved caspase-1 mar chomharradh air gnìomhachd sèid NLRP3 aoigheachd ann an sgrùdaidhean air galar G. duodenalis.Sheall na co-dhùnaidhean gu bheil mòran alpha-giardins an urra ri gnìomhachd àbhaisteach sèid, a tha co-chòrdail ri lorg prìomh mholacilean fòirneart a tha an sàs ann am bacteria agus bhìorasan.Ach, chan eil anns an sgrùdadh againn ach scrion tòiseachaidh agus tha moileciuilean eile ann a dh’ fhaodas inflammasomes neo-chlasaigeach a chuir an gnìomh, mar a lorg an sgrùdadh a rinn sinn roimhe an dà chuid inflammasomes clasaigeach agus neo-chlasaigeach ann an galar G. duodenalis [13].Gus faighinn a-mach a bheil am p20 caspase-1 air a ghineadh co-cheangailte ris an NLRP3 inflammasome, chuir sinn thairis giardins alpha-2 agus alpha-7.3 a-steach gu macrophages peritoneal luchag gus prìomh ìrean faireachdainn pròtain moileciuil agus ìrean oligomerization ASC a dhearbhadh, a’ dearbhadh gu bheil an dà chuid α-giardins a ’gnìomhachadh inflammasome NLRP3.Tha na toraidhean againn beagan eadar-dhealaichte bho fheadhainn Manko-Prykhoda et al., A dh’ innis gum faod brosnachadh ceallan Caco-2 le gathan G. muris no E. coli EPEC leis fhèin àrdachadh ann an dian fluorescence NLRP3, ASC, agus caspase-1, ged nach robh e gu mòr, ged a mheudaich cosgais G. muris agus E. coli ìrean trì pròtainean [49].Faodaidh an eadar-dhealachadh seo a bhith mar thoradh air eadar-dhealachaidhean ann an taghadh gnèithean Giardia, loidhnichean cealla, agus ceallan bun-sgoile.Rinn sinn cuideachd measaidhean in vivo a’ cleachdadh MCC950 ann an luchagan boireann 5-seachdain a dh’ aois WT C57BL/6, a tha nas buailtiche do G. duodenalis.Tha MCC950 na neach-dìon NLRP3 moileciuil beag cumhachdach agus roghnach a bhios a’ bacadh gnìomhachd canonical agus neo-chananach NLRP3 aig dùmhlachd nanomolar.Tha MCC950 a 'bacadh gnìomhachd NLRP3 ach chan eil e a' toirt buaidh air gnìomhachd slighean sèididh AIM2, NLRC4, agus NLRP1 no slighean comharran TLR [27].Bidh MCC950 a’ bacadh gnìomhachd NLRP3 ach chan eil e a’ cur bacadh air tòiseachadh NLRP3, K+ efflux, Ca2+ influx, no an eadar-obrachadh eadar NLRP3 agus ASC;an àite sin, tha e a 'cur bacadh air gnìomhachd inflammasome NLRP3 le bhith a' bacadh oligomerization ASC [27].Mar sin, chleachd sinn MCC950 ann an sgrùdadh in vivo gus faighinn a-mach dè an àite a th’ aig an NLRP3 inflammasome às deidh in-stealladh giardine.Bidh caspase-1 p10 gnìomhaichte a 'ceangal cytokines pro-inflammatory pro-IL-1β agus pro-IL-18 gu IL-1β aibidh agus IL-18 [50].Anns an sgrùdadh seo, chaidh ìrean serum IL-1β ann an luchagan le làimhseachadh giardine le no às aonais MCC950 a chleachdadh mar chomharra air an deach an NLRP3 inflammasome a chuir an gnìomh.Mar a bhiodh dùil, lùghdaich làimhseachadh MCC950 gu mòr ìrean serum IL-1β.Tha an dàta seo a’ sealltainn gu soilleir gu bheil G. duodenalis giardin alfa-2 agus giardin alfa-7.3 comasach air an luchag NLRP3 inflammasome a chuir an gnìomh.
Tha dàta cudromach a chaidh a chruinneachadh thar nan deich bliadhna a dh’ fhalbh air sealltainn gur e IL-17A am prìomh riaghlaiche dìonachd an aghaidh G. muris, a’ toirt a-steach comharran IL-17RA, a’ toirt a-mach peptides antimicrobial, agus a’ riaghladh gnìomhachd lìonaidh [51].Ach, bidh galar Giardia a ’tachairt nas trice ann an inbhich òga, agus chaidh aithris nach eil galar Giardia ann an luchagan òga a’ gnìomhachadh freagairt IL-17A gus a bhuaidh dìon a thoirt gu buil [52], a ’toirt air luchd-rannsachaidh coimhead airson Giardia immunomodulatory eile.uidheamachdan airson galar helminth.Thuirt ùghdaran sgrùdadh o chionn ghoirid gum faod G. muris an NLRP3 inflammasome le E. coli EPEC a chuir an gnìomh, a bhrosnaicheas cinneasachadh peptides antimicrobial agus a lughdaicheas a chomas ceangail agus an àireamh de trophozoites anns an t-slighe caolan, agus mar sin a’ lughdachadh cho dona sa tha coloin. galaran air adhbhrachadh le bacilli [49].Tha an NLRP3 inflammasome an sàs ann an leasachadh diofar ghalaran.Tha sgrùdaidhean air sealltainn gu bheil Pseudomonas aeruginosa a’ piobrachadh autophagy ann am macrophages gus bàs cealla a sheachnadh, agus tha am pròiseas seo an urra ri gnìomhachadh an NLRP3 inflammasome [53].Airson N. caninum, tha gnìomhachd gnè ocsaidean reactive-meadhanaichte den NLRP3 inflammasome a’ cuingealachadh ath-riochdachadh san òstair, ga fhàgail na thargaid teirpeach [9].Thathas air faighinn a-mach gu bheil paracoccidioides brasiliensis a’ toirt a-steach gnìomhachadh an NLRP3 inflammasome ann an ceallan dendritic a thig bho smior cnàimh lucha, agus mar thoradh air an sin chaidh an cytokine inflammatory IL-1β a leigeil ma sgaoil, aig a bheil pàirt deatamach ann an dìon aoigheachd [10].Bidh grunn ghnèithean Leishmania, a 'gabhail a-steach L. amazonensis, L. major, L. braziliensis, agus L. infantum chagasi, a' cur an gnìomh NLRP3 agus caspase-1 a tha an urra ri ASC ann am macrophages, a bharrachd air galar Leishmania.Tha ath-riochdachadh parasite air a leasachadh ann an luchagan a tha easbhaidheach anns a’ ghine NLRP3 / ASC / caspase-1 [11].Zamboni et al.Thathas air aithris gu bheil galar Leishmania ag adhbhrachadh gnìomhachd an NLRP3 inflammasome ann am macrophages, a tha a’ cuingealachadh ath-riochdachadh dìosganach intracellular.Mar sin, faodaidh Leishmania bacadh a chuir air gnìomhachd NLRP3 mar ro-innleachd seachnaidh.Ann an sgrùdaidhean in vivo, chuir an inflammasome NLRP3 ri cuir às do Leishmania, ach cha tug e buaidh air figheagan [54].Air an làimh eile, ann an sgrùdaidhean helminthiasis, chuir gnìomhachd an NLRP3 inflammasome bacadh air dìonachd dìon an aoigh an aghaidh helminthiasis gastrointestinal [12].Is e Shigella aon de na prìomh bacteria a tha ag adhbhrachadh a’ bhuineach air feadh an t-saoghail.Faodaidh na bacteria sin cinneasachadh IL-1β a bhrosnachadh tro efflux K + receptor-mediated P2X7, gnèithean ocsaidean reactive, searbhag lysosomal, agus milleadh mitochondrial.Bidh an NLRP3 inflammasome gu h-àicheil a’ riaghladh phagocytosis agus gnìomhachd bactericidal de macrophages an aghaidh Shigella [55].Tha sgrùdaidhean Plasmodium air sealltainn gu bheil luchagan easbhaidheach AIM2, NLRP3 no caspase-1 air an galar le Plasmodium a’ toirt a-mach ìrean àrda de interferon seòrsa 1 agus gu bheil iad nas seasmhaiche ri galar Plasmodium [56].Ach, chan eil e soilleir dè an àite a th’ aig alpha-2 giardine agus alpha-7.3 giardine ann a bhith a’ brosnachadh gnìomhachd pathogenic de shèid NLRP3 ann an luchagan.
Anns an sgrùdadh seo, lùghdaich casg air an NLRP3 inflammasome le MCC950 BW agus mheudaich e an àireamh de trophozoites ann an lionn lavage intestinal ann an luchagan, a’ leantainn gu atharrachaidhean pathological nas cruaidhe ann an clò duodenal.Bidh Alpha-2 giardine agus alpha-7.3 giardine a ’gnìomhachadh an luchag aoigheachd NLRP3 inflammasome, ag àrdachadh cuideam bodhaig na luchaige, a’ lughdachadh an àireamh de trophozoites ann an lionn lavage intestinal, agus a ’lughdachadh lotan pathological duodenal.Tha na co-dhùnaidhean sin a 'toirt a-mach gum faod G. duodenalis an neach-aoigheachd NLRP3 a chur an gnìomh tro alpha-2 giardine agus alpha-7,3 giardine, a' lùghdachadh cho dona 'sa tha G. duodenalis ann an luchagan.
Còmhla, tha na co-dhùnaidhean againn a’ sealltainn gu bheil giardines alpha-2 agus alpha-7.3 ag adhbhrachadh gnìomhachd an aoigheachd NLRP3 inflammasome agus a’ lughdachadh gabhaltachd G. duodenalis ann an luchagan.Mar sin, tha na moileciuilean sin nan targaidean gealltanach airson casg giardiasis.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
Liang AKS, Liang AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM.Giardiasis: sealladh farsaing.Chaidh innse o chionn ghoirid gu bheil aileirdsidh aig Pat Inflamm ri drogaichean.2019; 13:134–43.
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: ath-sgrùdadh air pharmacotherapy.Beachd eòlaiche air cungadair.2007;8: 1885–902.
Tian Huafeng, Chen Bin, Wen Jianfeng.Giardiasis, strì an aghaidh dhrogaichean agus lorg thargaidean ùra.A 'toirt buaidh air targaidean dhrogaichean mì-rian.2010; 10:295–302.
Wang Z, Zhang X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T, msaa NLRP3 galaran inflammasome agus sèid.Oxide Med Cell Longev.2020; 2020: 4063562.
Chen GY, Núñez G. Dreuchd an inflammasome ann an sèid caolan agus aillse.Gastroenterology.2011;141:1986–99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. Canonical agus neo-àbhaisteach NLRP3 gnìomhachd inflammasome aig crois-rathaid fulangas dìonachd agus sèid gut.ro-dhìonach.2017; 8:36.
Li L, Wang XC, Gong PT, Zhang N, Zhang X, Li S, et al.Tha gnìomhachd inflammasome NLRP3 air a mheadhanachadh le ROS an sàs mar fhreagairt do ghalar N. caninum.Parasite vector.2020; 13:449.